動(dòng)物胞漿蛋白微量制備試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn) DNA 只存在于細(xì)胞核內(nèi)，因此參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和 DNA 復(fù)制的蛋白質(zhì)主要存在于細(xì)胞核中，要研究蛋白質(zhì)與 DNA 的相互作用，首先需要制備能夠與 DNA 作用的天然細(xì)胞核蛋白質(zhì)。目前、細(xì)胞核蛋白質(zhì)制備方法一般都比較繁瑣，一次處理大量樣品時(shí)尤其不便，為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，用于從哺乳動(dòng)物組織和培養(yǎng)細(xì)胞核蛋白的微量提取，它具有下列特點(diǎn)：
1. 提取制備過程簡便，只需要一小時(shí)。
2. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，尤其適合同時(shí)處理多個(gè)樣品。
3. 可用于培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞，也可以用于組織細(xì)胞。
4. 制備的核蛋白能保持天然活性，可以直接用于轉(zhuǎn)錄因子活性分析、凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、DNA 足跡圖實(shí)驗(yàn)和甲基化干擾實(shí)驗(yàn)酶活性測定等研究。
動(dòng)物胞漿蛋白微量制備試劑盒運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。
自備試劑 PBS 緩沖液，PMSF 溶液，DTT 溶液
使用方法 1、 對貼壁細(xì)胞：將 5×105-7 個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)到覆蓋率為 55-65%，吸棄培養(yǎng)基，用自備的預(yù)冷 PBS 緩沖液洗滌細(xì)胞一次，將細(xì)胞從壁上小心刮下，轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的塑料離心管中，4℃ 3000 rpm 離心 5 分鐘，小心棄上清。直接進(jìn)入第三步進(jìn)行后續(xù)處理。
2、 對懸浮細(xì)胞：直接將 5×105-7 個(gè)的懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 預(yù)冷的塑料離心管中，4℃ 3000 rpm 離心 5 分鐘，用自備的預(yù)冷的 PBS 洗滌細(xì)胞沉淀一次，3000 rpm 離心 5 分鐘，小心棄上清。直接進(jìn)入第三步處理細(xì)胞沉淀。說明：懸浮細(xì)胞制備胞漿的效果一般好于貼壁細(xì)胞。
3、 在細(xì)胞沉淀中加入相當(dāng)于沉淀細(xì)胞體積 5 倍或更多的預(yù)冷的溶液 A 重懸細(xì)胞，一般不超過 300 uL-500 uL 溶液 A。溶液 A 在臨用前加入終濃度為 0.2mM 的 PMSF 和 1mM 的 DTT。PMSF 和 DTT 在水溶液中都不穩(wěn)定，只能臨用提加入。
4、 冰浴靜置 10 分鐘。
5、 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的 15 mL 的 Dounce 或 Potter 玻璃勻漿器中（溫和破裂細(xì)胞用），上下勻漿 10-15 次（為檢查效果，可取少量裂解物與自備的 0.01%Trypan Blue 溶液混合，在顯微鏡下觀察，只有破裂細(xì)胞的細(xì)胞核才能染色，完整細(xì)胞無色。如果需要，可增加勻漿次數(shù)直到 80-90%以上的細(xì)胞裂解為止 ）。
6、 小心轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的離心管中，4℃ 17000g 離心 15 分鐘，線粒體，細(xì)胞核等細(xì)胞器將沉淀到管底。保留上清（胞漿部分）待用。