RIPA裂解液(中強(qiáng)度)
產(chǎn)品及特點(diǎn)RIPA(Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 Western、IP 等實(shí)驗(yàn)。本產(chǎn)品裂解能力強(qiáng)度溫和,對(duì)膜蛋白的處理能力一般;對(duì)核蛋白的提取能力較好;對(duì)胞漿蛋白、胞漿磷酸化蛋白和各種轉(zhuǎn)錄因子處理效果很好。本產(chǎn)品含有各種蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制劑,能有效防止各種蛋白酶對(duì)目的蛋白的降解。我公司各種 RIPA 裂解液產(chǎn)品特點(diǎn)見下表:
產(chǎn)品名稱RIPA 裂解液(強(qiáng))RIPA 裂解液(中)RIPA 裂解液(弱)
有效裂解成分
1% Triton
X-100, 1%
deoxycholate,
0.1% SDS
1% NP-40,
0.5%
deoxycholate,
0.1% SDS
1% NP-40,
0.25%
deoxycholate
裂解強(qiáng)度 強(qiáng) 中 溫和
對(duì)膜蛋白的提取 很好 較好 一般
對(duì)胞漿蛋白的提取 很好 很好 很好
對(duì)核蛋白的提取 很好 較好 較好
胞漿磷酸化蛋白提取 很好 很好 很好
細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子提取 很好 很好 很好
含蛋白酶抑制劑 是 是 是
含磷酸酯酶抑制劑 是 是 是
主要用途 WB, IP WB, IP WB, IP, co-IP
規(guī)格及成分 成 份 產(chǎn)品編號(hào) 大立盒包裝
RIPA 裂解液(中等強(qiáng)度) LM131007a 250 mL
使用手冊(cè) LM131007sc 1 份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存,有效期一年。
自備試劑 PMSF
使用方法 對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF,
使 PMSF 的最終濃度為 1mM。
2. 裂解細(xì)胞
2.1 對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血
清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比
例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞 1-2
秒后,細(xì)胞就會(huì)被裂解。
2.2 對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管,然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。
注意:通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
對(duì)于組織樣品:
1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF,使 PMSF 的最終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注:RIPA 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正?,F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的復(fù)合物。在不檢測和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,例如 NF-kappaB、p53 等時(shí),通常不必進(jìn)行超聲處理,就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。
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