柱式病毒DNAout
產(chǎn)品及特點 本產(chǎn)品是基因一管式病毒 DNAOUT 的基礎(chǔ)上開發(fā)的、專門用于從血清(血漿)等液體樣品及拭子(咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、陰道拭子等)中提取微量病毒DNA 的產(chǎn)品,它具有下列特點:
1. 操作簡單,整個過程只需要 20 分鐘左右,不需要額外在洗柱液中補加乙醇。
2. 靈敏度高,通過 PCR 檢測到的最終靈敏度可以達到 30-50 拷貝/mL。
3. 安全無毒,不需要使用苯酚和氯仿等有機溶液。
4. 如果加上病毒離心富集步驟,最多可以處理 1.5 mL 液體病毒樣品。
5. 與 PCR 和熒光 PCR 兼容。
6. 價廉物美,性價比遠高于國外同類產(chǎn)品。
7. 適用于各種材料,包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養(yǎng)細胞上清液等無細胞材料。
柱式病毒DNAout
規(guī)格及成分 成 份 編 號 大扁盒包裝
DNA 病毒裂解液 3674a 30 mL 上柱結(jié)合液 190602 40 mL 離心吸附柱 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脫液 3.0 170603 10 mL 使用手冊 70701sc 1 份
柱式病毒DNAout運輸及保存 常溫運輸及保存,DNA 病毒裂解液長期(1 月以上)放置時需要放 4℃,有效期一年。自備試劑 無,但需要自備 RNase-free 的 1.5 mL 離心管(耗材)。
使用方法 1. 如果有 N 個樣品,標記 N+2 個 1.5-2 mL 螺旋蓋塑料離心管(如 SarstedtCAT#:782.694.006),多出的一個為陽性對照,一個為陰性對照。為避免污染,建議不要使用壓蓋式塑料離心管。在每個管上做個標記,以在后續(xù)操作時區(qū)別向心面和離心面。然后在離心管中分別加入 0.2 mL 液體樣品(血清、血漿、尿液、腦脊液、唾液、眼淚等等),陽性對照和陰性對照。
1.1、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各種拭子樣品,則將拭子放入 0.2mL 自備生理鹽水中擠壓出液體,然后取 0.2mL 進行提取。
1.2、 如果是糞便等半固定樣品,則取約 0.3mL 的樣品,加入 0.3mL 自備生理鹽水,震蕩重懸,離心取 0.2mL 上清進行提取。
1.3、 如果血液,細胞培養(yǎng)液等含細胞的液體,可以離心用上清,也可以直接取用,但后者提取的病毒 DNA 中會有少量細胞的基因組 DNA 污染(但不影響 PCR)。血漿的抗凝劑必須是 EDTA 或 ACD,不能是肝素。使用ACD 時由于所加入 ACD 會增加體積,樣品會被稀釋,得到的病毒滴度會比使用 EDTA 低 15%左右。血漿按 0.6mL/管的量分裝保存,以避免反復凍融。
1.4、 如果樣品是實體組織或培養(yǎng)細胞,則需要在自備生理鹽水中勻漿后離心,用 0.2mL 上清液(含病毒)進行提取,但此種情況下最后得到的病毒DNA 不可避免的會含有少量基因組 DNA 污染(但不影響 PCR 檢測)。
1.5、 如果液體樣品中的病毒需要富集,可以使用 1.5 mL 上述方法得到的液體在 4℃ 24,000 g 冷凍離心 60 分鐘, 移棄 1.3 mL、用剩下的 0.2mL 繼續(xù)操作。
2. 加入 0.6 mL DNA 病毒裂解液到各離心管中,振蕩 30 秒混勻后室溫放置 10 分鐘裂解病毒。注意:DNA 病毒裂解液在 4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀,使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
3. 加入 0.8mL 上柱結(jié)合液到離心管中,顛倒混勻后轉(zhuǎn)移一半的混合液(0.8mL)
到離心吸附柱中,室溫放置 2 分鐘。
4. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集管中。
5. 將剩余的另外一半裂解液(0.8mL)轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,室溫放置 2 分鐘。
6. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集管中。
7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中,12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集管中。
8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中,12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集管中。此為第二次洗滌,可以跳過。
9. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘(干甩),棄含穿透液的離心管。
10. 將干甩后的離心吸附柱套入到一個自備的 RNase-free 的 1.5 mL 離心管中,在離心吸附柱的濾膜的中部加入 30-100 uL DNA 洗脫液 3.0,然后室溫放置 2 分鐘。
11. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘,離心管中的溶液即為病毒 DNA 溶液。
12. DNA 樣品可以直接用于 PCR,也可放-20℃長期保存。
關(guān)鍵字: 柱式病毒DNAout廠家;柱式病毒DNAout現(xiàn)貨
上??道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務于一體的一家生物科技企業(yè),專營生化試劑、標準品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細胞生物學,分子生物學等高生物產(chǎn)品??偛课挥谏虾#⒃诒本?、廣東,江西,吉林等全國30多個省市設有分公司和代理機構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學院、清華、北大、復旦,上海交大,復旦醫(yī)學院,上海中醫(yī)藥大學,華東師范大學,第二軍醫(yī)大學,曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務確。