名稱 MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）

規(guī)格 500T

存儲(chǔ) MTT溶液-20℃保存；Formazan溶解液室溫或-20℃保存。

產(chǎn)品組分 

試劑組成  規(guī)格 保存
試劑(A): MTT Solution(5mg/ml)
5 mL -20℃，避光
試劑(B): Formazan Solvent 60 mL RT
 

自備材料：

1、 細(xì)胞培養(yǎng)液
2、 胰蛋白酶消化液
3、 低速離心機(jī)
4、 96 孔培養(yǎng)板
5、 細(xì)胞計(jì)數(shù)板或計(jì)數(shù)器
6、 細(xì)胞培養(yǎng)箱
7、 搖床
8、 顯微鏡
9、 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀

 
【注】12 個(gè)月有效。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介 

MTT 比色法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。 MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè)。MTT 檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍(lán)紫色 Formazan 并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。在特定溶劑存在的情況下，可以被完全溶解。然后通過(guò)酶標(biāo)儀可以測(cè)定 570nm 波長(zhǎng)附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。

Phygene MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒采用了特有的 Formazan solvent，使檢測(cè)本底低，靈敏度高，線性范圍寬。

使用說(shuō)明 

操作步驟(僅供參考)：

1、 細(xì)胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞(懸浮細(xì)胞無(wú)需消化)。

2、 低速離心，收集細(xì)胞沉淀。

3、 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。

4、 細(xì)胞接種于 96 孔培養(yǎng)板，一般接種密度為 3000～10000 個(gè)細(xì)胞/孔。通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加 3000 個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入 6000 個(gè)細(xì)胞。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定。

5、 37℃ 5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)或按照實(shí)驗(yàn)具體需要進(jìn)行培養(yǎng)，一般培養(yǎng) 6～24h。

6、 按照實(shí)驗(yàn)具體要求，給予 0～20μl 干預(yù)藥物處理，37℃ 5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)至合適時(shí)間。

7、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 10μl MTT solution 和 100μl 新鮮培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育 4h。

8、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 110μl Formazan solvent，置搖床上低速振蕩 10 min，使結(jié)晶物充分溶解。如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時(shí)間會(huì)短一些。如果紫色結(jié)晶較大或較多，溶解的時(shí)間會(huì)長(zhǎng)一些。

9、 在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀 570nm 測(cè)定各孔吸光度。

注意事項(xiàng) 

1、 MTT solution 盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請(qǐng)勿使用。

2、 由于使用 96 孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，應(yīng)注意蒸發(fā)問(wèn)題。

3、 MTT solution 在低溫情況下會(huì)凝固，置于室溫或 20～25℃水浴至全部融解后使用。

4、 Formazan solvent 可以-20℃儲(chǔ)存，當(dāng)產(chǎn)生沉淀或凝固時(shí)可以 37℃水浴孵育以促進(jìn)溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。

5、 觀察 formazan 是否完全溶解，亦可以借助光學(xué)顯微鏡觀察。

6、 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)盡量細(xì)菌避免污染。

7、 應(yīng)注意設(shè)立 OD 調(diào)零孔和對(duì)照。

8、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

MTT, a yellow tetrazole, is reduced to purple formazan in living cells. A solubilization solution (usually either dimethyl sulfoxide, an acidified ethanol solution, or a solution of the detergent sodium dodecyl sulfate in diluted hydrochloric acid) is added to dissolve the insoluble purple formazan product into a colored solution.