CCK-8細(xì)胞活力測定試劑根據(jù)專有配方配制，同等用量下的顯色效果與日本同仁CCK-8試劑相當(dāng)，明顯高于國內(nèi)某知名品牌產(chǎn)品。

規(guī)格

500T-5mL

1000T-10mL

貯藏條件

CCK-8在避光0~5℃的條件下存放一年，測定效果完全不變。在-20℃的條件下可以貯存更久。反復(fù)凍融會(huì)增加背景值，經(jīng)常使用時(shí)請于0~5℃條件下保存。

自備材料

1、10μl、100-200μl以及多通道移液器
2、帶有450nm濾光片的酶標(biāo)儀
3、96孔培養(yǎng)板
4、CO2培養(yǎng)箱

測定原理

1. CCK-8試劑檢測細(xì)胞活力，可用于細(xì)胞增殖和毒性分析，方法簡便而準(zhǔn)確。其基本原理為：該試劑中的WST–8與MTT類似，在電子載體1-甲氧基PMS的作用下，被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲臜染料（Formazan），甲臜的生成量與活細(xì)胞的數(shù)量和活力成正比，因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。

試劑的優(yōu)點(diǎn)

1、結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好 試劑不影響細(xì)胞活力，顯色產(chǎn)物直接溶解于培養(yǎng)液，直接測定OD值即可準(zhǔn)確反應(yīng)細(xì)胞活力。

2、操作省時(shí)簡單 試劑即開即用，無需配制；只需一步操作，即可測定。

3、安全性好 不含放射性同位素和有害有機(jī)溶劑，使用安全。

4、靈敏度高 靈敏度高于MTT、XTT和MTS等方法

使用方法

1、使用96孔板，細(xì)胞培養(yǎng)和處理完畢。

2、迅速加入CCK-8試劑，每孔10μl。

3、培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，37℃孵育1~4小時(shí)。

4、于450nm處測定OD值。

5、結(jié)果分析 將各測試孔的OD值減去對照孔或調(diào)零孔OD值。各平行孔的OD值取平均數(shù)。
細(xì)胞活力% = （加藥細(xì)胞OD-空白OD）/（對照細(xì)胞OD-空白OD）×100%

6、若使用96孔外的培養(yǎng)板，試劑用量等比例增減

使用注意事項(xiàng)

1、首次使用時(shí)，建議先做幾個(gè)孔摸索條件，考察接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。

2、加入試劑速度要快，以避免試劑殘留和加樣速度不一所致反應(yīng)時(shí)間不同造成的顯色誤差。有條件的情況下，建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。為避免槍頭上的殘留所帶來的加樣誤差，CCK-8試劑可在加樣前用培養(yǎng)基稀釋混勻。

3、試劑加入后輕輕振搖培養(yǎng)板，使CCK-8試劑與培養(yǎng)基充分混勻。

4、試劑加入后培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔細(xì)胞數(shù)量的多少而異。對于貼壁細(xì)胞，加入CCK-8的培養(yǎng)時(shí)間一般為1~4小時(shí)，但在培養(yǎng)30分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度（根據(jù)細(xì)胞種類而定）。與貼壁細(xì)胞相比，懸浮細(xì)胞較難顯色。對于懸浮細(xì)胞，在加入CCK-8培養(yǎng)1~4小時(shí)后，可先從培養(yǎng)箱中取出，目測染色程度或用酶標(biāo)儀測定決定。白細(xì)胞較難顯色，因此需要較長的CCK-8反應(yīng)時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量（~105個(gè)細(xì)胞/孔）。若顯色困難，可以將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時(shí)后再確定。注意：CCK-8的反應(yīng)時(shí)間以具體顯色的時(shí)間為準(zhǔn)。

5、CCK-8試劑中的WST-8會(huì)與還原劑反應(yīng)生成WST-8甲臜，如果實(shí)驗(yàn)中有還原劑，需要檢查背景的OD值，即在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入藥物，然后加入CCK-8試劑在一定時(shí)間內(nèi)檢測，和不加藥物的培養(yǎng)基進(jìn)行比較（只加CCK-8試劑），如果OD值明顯偏高，則說明有反應(yīng)。

6、若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色或pH發(fā)生變化，建議更換新鮮培養(yǎng)基后再加入CCK-8試劑。含有酚紅的培養(yǎng)基不影響本試劑的使用。

7、如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液，建議設(shè)定600nm（或600nm以上）作為參比波長，扣除參比波長的OD值即可。

8、如果要測定細(xì)胞的具體數(shù)量，需要先做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。

9、若測得OD值過高，可酌減鋪板細(xì)胞數(shù)或CCK-8試劑用量。