規(guī)格:50μL
保存:-20℃,避光保存。
SYBR Green I 是高靈敏的 DNA 熒光染料,適用于各種電泳分析,操作簡單,至少可檢出 20pg DNA,高于 EB 染色法 25-100 倍。SYBR Green I 與 dsDNA 結(jié)合熒光信號會增強 800-1000 倍,用SYBR Green I 染色的凝膠樣品熒光信號強,背景信號低,可適用于多種電泳分析。
SYBR Green I 適合于多種凝膠電泳方法:瓊脂糖凝膠,聚丙烯酰胺凝膠電泳,脈沖電場凝膠電泳以及毛細管電泳等。
SYBR Green I 與雙鏈 DNA 的親和力非常高,因此可以用做電泳前染色,對分子生物學(xué)中常用的酶(如:Taq 酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4 連接酶等)沒有抑制作用。另外,SYBR Green I 與 EB相比,誘變能力大大降低。
使用方法:
注意:染料使用前應(yīng)在室溫下徹底融化混勻后使用。
SYBR Green I 后染方法 (推薦方法)
1. 制作不含染料的凝膠,按照常規(guī)方法進行電泳。
2. 用 pH 7.0 - 8.5 的緩沖液(如:TAE,TBE 或 TE),按照 10000:1 的比例稀釋 SYBR GreenⅠ濃縮液(如 50ml 1×TAE 中加入 5μl 染料),混勻,制成染色溶液。
注:如要染色 RNA ,按照 5000 :1 比例稀釋。
3. 將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中,放入凝膠,用鋁箔蓋住容器使染料避光。室溫振蕩染色 10-30 分鐘,染色時間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿上染色,將配好的工作溶液輕輕地倒在膠板上,讓工作液均勻地覆蓋整個膠板,并染色 30 分鐘。玻璃平皿必須預(yù)先經(jīng)過硅烷化溶液處理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
4. 紫外燈下觀測。
SYBR Green I 預(yù)染方法
1. 6×SYBR loading buffer 預(yù)染液的配制:
6×SYBR loading buffer 預(yù)染液避光 2-8℃可以放置一個月以上。
2. 制膠:按常規(guī)方法制備凝膠,凝膠溫度降至 60℃左右時加入 10000×SYBR,使染料終濃度為 1×,如 40ml 凝膠溶液中加入 4μl 染料。
注:如要染色 RNA ,使染料終濃度為 2 ×(如 40ml 凝膠溶液中加入 8μl 染料)。
3. 樣品預(yù)染:取 1-2μl 6×SYBR loading buffer 預(yù)染液與電泳樣品和 Marker 混合,室溫預(yù)染3-5 分鐘。
4. 上樣、電泳后紫外燈下觀察。
使用注意事項
1.后染方法是推薦方法,能得到更好的電泳結(jié)果;由于 SYBR 對樣品過量非常敏感,預(yù)染方法容易出現(xiàn)條帶扭曲變形(建議泳道中每條帶的含量不要超過 5ng),請根據(jù)實際情況摸索出適合自己的實驗程序,
2. SRBR 對電泳緩沖液的 pH 要求嚴格,有效 pH 為 7.5-8.0,電泳時盡量使用新鮮配制的緩沖液,并保證合適的 pH 范圍。
3. SYBR Green 對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。
4. 使用酒精沉淀核酸中,SYBR Green I 可以全部從雙鏈核酸上去掉。
5. 如果想對用 SYBR Green I 染過的膠進行 Southern blot,建議在預(yù)雜交和雜交溶液中加入0.1%- 0.3% 的 SDS,可以有效去除 SYBR。
6. 在紫外下觀察,與雙鏈 DNA 接合的 SYBR Green I 呈現(xiàn)綠色熒光。如果膠中含有單鏈DNA 則顏色為橘黃。