產(chǎn)品名稱：PhyScript™ 2×SYBR Green PCR Mastermix

貨號：PH0120

規(guī)格：50T（1.25mL） | 200T（4×1.25mL）

存儲：本產(chǎn)品-20℃保存有效期至少一年，4℃可保存 3 個(gè)月。解凍后應(yīng)充分混勻，避免產(chǎn)生大量氣泡。

別名：實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒;Quantitative Real-time PCR Kit;Realtime PCR Kit；RT-PCR Kit

試劑組分：2×SYBR Green PCRmix 含有 PCR Buffer、MgCl2、dNTPs、HS Taq DNA Polymerase、SYBRGreen I、穩(wěn)定劑等成分。

產(chǎn)品簡介

 2×SYBR Green PCRmix 是采用 SYBR Green ?0?9 嵌合熒光法進(jìn)行 Real Time PCR 的專用試劑。含有常溫下完全封閉 Taq 酶活性的化學(xué)修飾法熱啟動 HS Taq DNA Polymerase，能夠有效抑制低溫條件下引物非特異性退火或者引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增，提高擴(kuò)增反應(yīng)的特異性。本試劑經(jīng)過特殊配制，采用優(yōu)化配方的 qPCR 專用 Buffer，大大提高了 qPCR 反應(yīng)的擴(kuò)增效率和檢測靈敏度，可以在較寬的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，準(zhǔn)確進(jìn)行定量。本試劑與多數(shù)廠家的熒光定量 PCR儀兼容，如 Applied Biosystems、 Eppendorf 、Bio-Rad 和 Roche 等。

產(chǎn)品特性

高特異性：本產(chǎn)品采用熱啟動 DNA 聚合酶，90℃以上 2min 后具有擴(kuò)增活性，可大大提高 PCR 產(chǎn)物的特 異性。 靈敏度：本產(chǎn)品包含的優(yōu)化的緩沖液可檢測低拷貝數(shù)的模板，且重復(fù)性好。 高適用性：本產(chǎn)品可適用于任意熒光定量 PCR 儀。

試劑原理

本產(chǎn)品利用化學(xué)修飾熱啟動酶 HS Taq DNA polymerase 進(jìn)行 qPCR 擴(kuò)增反應(yīng)，通過擴(kuò)增產(chǎn)物嵌合 SYBR Green ?0?9 而激發(fā)的熒光信號強(qiáng)度進(jìn)行檢測。

1、PCR

PCR 法是以微量 DNA 進(jìn)行目的片段擴(kuò)增的方法。通過 DNA 鏈的熱變性、引物退火、DNA 聚合酶作用下引物的延伸三個(gè)步驟循環(huán)往復(fù)，可在短時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增大量 DNA 片段。

2、熒光檢出

SYBR Green I 是一種結(jié)合于小溝中的雙鏈 DNA 結(jié)合染料。與雙鏈 DNA 結(jié)合后，其熒光大大增強(qiáng)，吸收波長約為 497nm，發(fā)射波長約為 520nm。SYBR Green I 可以與所有的雙鏈 DNA 相結(jié)合，無需使用探針，即可實(shí)現(xiàn)檢測，通用性好，且靈敏度很高。但是，由于 SYBR Green I 與所有的雙鏈 DNA 相結(jié)合，因此由引物二聚體、單鏈二級結(jié)構(gòu)以及錯誤的擴(kuò)增產(chǎn)物引起的假陽性會影響定量的精確性。在定量儀器檢測過程中，可以通過測量升高溫度后熒光的變化，由解鏈曲線來分析產(chǎn)物的均一性，從而區(qū)分產(chǎn)物的融解峰溫度而區(qū)分特異與非特異的產(chǎn)物。

注意事項(xiàng)

1、2×SYBR Green PCRmix 經(jīng)過特殊配制，采用化學(xué)修飾熱啟動酶，具有更高特異性；

2、對于退火溫度較低的引物或超過 200bp 長片段擴(kuò)增建議采用三步法；

3、擴(kuò)增前后要使用專用的區(qū)域和移液器，戴手套操作并經(jīng)常更換，PCR反應(yīng)完成后切勿打開反應(yīng)管。以限度的減少PCR產(chǎn)物對樣品的污染。