磺化Cy7是Cy7(Cyanine 7)的水溶型。它的光譜性質(zhì)和Cy7類似,屬近紅外熒光染料。由于它的熒光波長(Em:774nm)恰好處于肌體組織近紅外窗口 I 的區(qū)域(肌體的血液,體液和組織此區(qū)域背景熒光弱,而長波長穿透性強(qiáng)),所以磺化Cy7常常應(yīng)用于小動物活體體內(nèi)成像中?;腔疌y7熒光肉眼不可見,顯微鏡觀察時(shí)需要近紅外濾片,很多熒光顯微鏡(包括共聚焦顯微鏡)并不配備,但是流式細(xì)胞儀(flow cytometry)常常配備Cy7濾片組?;腔疌y7是常用熒光染料,磺化Cy7可以用來標(biāo)記核酸,蛋白,抗體,多肽等,它是最常見的小動物顯影劑之一。
NHS活化酯(N-羥基琥珀酰亞胺酯,N-hydroxysuccinimide ester(NHS),succinimidyl ester(SE))是生物標(biāo)記反應(yīng)中最常用的活化基團(tuán)。它活化Cy5分子中的羧基,讓它可以和目標(biāo)生物分子上的胺基(主要伯胺)反應(yīng)生成穩(wěn)定的酰胺鍵,從而把Cy5分子標(biāo)記到生物大分子上。由于游離胺基是蛋白,抗體,多肽表面的常見官能團(tuán)(來自于賴胺酸側(cè)鏈),Cy5-NHS可以和它們直接反應(yīng)。核酸分子中天然不帶游離胺基,只有胺基修飾過的RNA或者DNA才可以和Cy5-NHS反應(yīng)。
磺化Cy7-NHS活化酯的水溶性極高,所以在標(biāo)記反應(yīng)中不需要使用有機(jī)共溶劑,特別適合標(biāo)記蛋白等對有機(jī)溶劑敏感的生物分子。另外磺化Cy7水溶性極好,并且染料分子本身帶電荷,標(biāo)記到蛋白表面后不會引發(fā)疏水性蛋白聚集,提高熒光標(biāo)記產(chǎn)物的穩(wěn)定性?;腔疌y7-NHS也溶于甲醇,DMSO,DMF等有機(jī)溶劑,標(biāo)記反應(yīng)也可以在純有機(jī)溶劑中進(jìn)行。
磺化Cy7-NHS標(biāo)記后的產(chǎn)物Ex/Em是748/774nm。和它具有相似熒光特性的染料包括Alexa Fluor 750,DyLight 755等。
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