磺化Cy3是Cy3(Cyanine 3)的水溶型。它的光譜性質(zhì)和Cy3類似,在熒光顯微鏡下發(fā)橘黃色熒光。它的熒光很亮,并且對pH不敏感,一般可以用530nm-561nm的激光束激發(fā)然后用 TRITC (tetramethylrhodamine) 的濾片觀察,所以在絕大部分熒光儀器上都可以使用。標(biāo)記后,樣品背景熒光一般認(rèn)為比TAMRA等系列的染料低。 磺化Cy3可以用來標(biāo)記蛋白,抗體,多肽,核酸等各種生物分子。
NHS活化酯(N-羥基琥珀酰亞胺酯,N-hydroxysuccinimide ester(NHS),succinimidyl ester(SE))是生物標(biāo)記反應(yīng)中最常用的活化基團(tuán)。它活化Cy3分子中的羧基,讓它可以和目標(biāo)生物分子上的胺基(主要伯胺)反應(yīng)生成穩(wěn)定的酰胺鍵,從而把Cy3分子標(biāo)記到生物大分子上。由于游離胺基是蛋白,抗體,多肽表面的常見官能團(tuán)(來自于賴胺酸側(cè)鏈),Cy3-NHS可以和它們直接反應(yīng)。核酸分子中天然不帶游離胺基,只有胺基修飾過的RNA或者DNA才可以和Cy3-NHS反應(yīng)。
磺化Cy3-NHS活化酯的水溶性極高,所以在標(biāo)記反應(yīng)中不需要使用有機(jī)共溶劑,特別適合標(biāo)記蛋白等對有機(jī)溶劑敏感的生物分子。另外磺化Cy3水溶性極好,并且染料分子本身帶電荷,標(biāo)記到蛋白表面后不會引發(fā)疏水性蛋白聚集,提高熒光標(biāo)記產(chǎn)物的穩(wěn)定性?;腔疌y3-NHS也溶于甲醇,DMSO,DMF等有機(jī)溶劑,標(biāo)記反應(yīng)也可以在純有機(jī)溶劑中進(jìn)行
磺化Cy3-NHS標(biāo)記后的產(chǎn)物Ex/Em是550/566nm。和它具有相似熒光特性的染料包括TAMRA,Alexa Fluor 555,DyLight 550,BODIPY? TMR-X等
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