??????碧云天的Mouse IL-10 ELISA Kit (Mouse Interleukin-10 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠白細胞介素10酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的IL-10的ELISA試劑盒。
??????本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結(jié)果表明，最小檢出量為8.3pg/ml，與小鼠IL-10 sR、人IL-10、IL-10 sR等均沒有交叉反應，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????IL-10即白細胞介素-10(簡稱白介10)，又稱細胞因子合成抑制因子(CSIF)，屬于IL-10 α螺旋細胞因子家族中的一員，該家族還包括IL-19、IL-20、IL-22、IL-24和IL-26/AK155等細胞因子。IL-10通常由活化的造血細胞分泌，此外肝星狀細胞、角質(zhì)細胞和胚胎滋養(yǎng)葉細胞也能分泌IL-10。小鼠細胞能夠響應人IL-10，而小鼠的IL-10并不能作用于人源細胞上。成熟的小鼠IL-10與大鼠IL-10具有85%的氨基酸同源性，與牛、犬、馬、貓、人、綿羊和豬的IL-10具有70-77%的氨基酸同源性。成熟的IL-10分子量在36kDa，其包含兩個鏈內(nèi)二硫鍵，以非共價二聚體的形式存在。
??????IL-10受體復合物由兩部分組成：IL-10 Rα，分子量為110kDa的跨膜糖蛋白，主要表達在淋巴細胞，自然殺傷細胞、巨噬細胞、單核細胞、星形膠質(zhì)細胞、腸內(nèi)皮細胞、胚胎滋養(yǎng)葉細胞和活化的肝星狀細胞；IL-10 Rβ同樣為跨膜蛋白，分子量在75kDa，在多種細胞上都有表達。IL-10二聚體與兩條IL-10 Rα鏈結(jié)合，隨后招募兩條IL-10 Rβ鏈。IL-10 Rβ并不能直接與IL-10結(jié)合，但它在信號傳導過程中起重要作用。IL-10 Rβ同時還是IL-22、IL-26、IL-28和IL-29的受體組成部分。
??????IL-10對免疫反應的調(diào)節(jié)有激活和抑制兩方面的作用。IL-10能抑制Th1細胞和Th2細胞的活化和擴增，能促進M2型巨噬細胞的產(chǎn)生。Treg細胞和調(diào)節(jié)性B細胞分泌的IL-10對Treg細胞的生長起重要作用，然而在腫瘤微環(huán)境中，IL-10則會抑制Treg細胞的擴增。IL-10可以促進CD8⁺ T細胞在腫瘤部位的蓄積和擴增，IL-10在Sjogren’s 綜合征、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤和卵巢癌中表達上升。
??????IL-10與受體復合物結(jié)合后首先導致JAK1和YTK2的磷酸化，隨后使得STAT1和STAT3發(fā)生磷酸化。磷酸化的STAT3形成二聚體進入細胞核對靶基因進行調(diào)控。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中小鼠IL-10的濃度，其原理見圖1。小鼠IL-10特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的小鼠IL-10會與捕獲抗體結(jié)合。當加入生物素化的抗小鼠IL-10抗體后，生物素化抗小鼠IL-10抗體與小鼠IL-10結(jié)合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。小鼠IL-10濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

??????一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：

保存條件：
??????除標準品外，4℃保存6個月內(nèi)有效。標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效。
注意事項：
??????由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
??????TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????不宜混用不同批號的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過獨立測試。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結(jié)果誤差較大。
??????檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
??????加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。