??????pET-N-GST-PreScission是一種用于表達N端含有GST標簽(Glutathione S-transferase tag, GST tag)的目的蛋白的原核表達質(zhì)粒。本質(zhì)粒N端GST標簽后含有PreScission酶切位點，可通過PreScission Protease (P2302/P2303)切除N端的GST標簽。本質(zhì)粒為卡那霉素抗性。
??????本質(zhì)粒含有T7啟動子/lac操縱子，可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導下高效啟動目的蛋白表達。在多克隆位點的前面有一個GST標簽的編碼序列。因此在多克隆位點根據(jù)讀碼框插入目的基因就可以表達N端含有GST標簽的目的蛋白。
??????本載體在N端GST標簽與多克隆位點之間含有PreScission蛋白酶識別的八肽序列LEVLFQGP，對應的核酸序列為
CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，因此在目的蛋白純化后可以利用PreScission Protease切除N端的GST標簽。PreScission
蛋白酶酶切發(fā)生在八肽序列的Q和G之間，因此在酶切去除GST標簽的時候目的蛋白的N端留下兩個額外的氨基酸殘基GP。
??????通常可以采用如BeyoGold? GST-tag Purification Resin (P2251/P2253/P2255)和GST標簽蛋白純化試劑盒(P2262)等純化本質(zhì)粒表達的目的蛋白，也可以使用GST抗體(AG768/AF0174)檢測和少量地分離純化目的蛋白。
??????pET-N-GST-PreScission質(zhì)粒的主要信息如下：

??????pET-N-GST-PreScission質(zhì)粒(5943bp)的圖譜如下：

??????pET-N-GST-PreScission的多克隆位點的詳細圖譜如下：

??????pET-N-GST-PreScission中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pET-N-GST-PreScission)包括：

??????pET-N-GST-PreScission中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pET-N-GST-PreScission once)包括：

??????pET-N-GST-PreScission質(zhì)粒中推薦使用的測序引物序列如下：
??????pET-F primer (5619-5638): 5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
??????pET-R primer (5857-5876): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
??????pET-N-GST-PreScission的全序列信息：D2916 pET-N-GST-PreScission.txt。
??????不同原核表達質(zhì)粒的比較和選擇，以及標簽、蛋白酶切位點和蛋白共表達的考慮可以參考如下網(wǎng)頁：
??????http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
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??????-20℃保存。
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