| 產(chǎn)品編號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品包裝 |
產(chǎn)品價(jià)格 |
| D2916-100μg |
pET-N-GST-PreScission |
100μg |
1086.00元 |
??????pET-N-GST-PreScission是一種用于表達(dá)N端含有GST標(biāo)簽(Glutathione S-transferase tag, GST tag)的目的蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒。本質(zhì)粒N端GST標(biāo)簽后含有PreScission酶切位點(diǎn)，可通過(guò)PreScission Protease (P2302/P2303)切除N端的GST標(biāo)簽。本質(zhì)粒為卡那霉素抗性。
??????本質(zhì)粒含有T7啟動(dòng)子/lac操縱子，可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動(dòng)目的蛋白表達(dá)。在多克隆位點(diǎn)的前面有一個(gè)GST標(biāo)簽的編碼序列。因此在多克隆位點(diǎn)根據(jù)讀碼框插入目的基因就可以表達(dá)N端含有GST標(biāo)簽的目的蛋白。
??????本載體在N端GST標(biāo)簽與多克隆位點(diǎn)之間含有PreScission蛋白酶識(shí)別的八肽序列LEVLFQGP，對(duì)應(yīng)的核酸序列為
CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，因此在目的蛋白純化后可以利用PreScission Protease切除N端的GST標(biāo)簽。PreScission
蛋白酶酶切發(fā)生在八肽序列的Q和G之間，因此在酶切去除GST標(biāo)簽的時(shí)候目的蛋白的N端留下兩個(gè)額外的氨基酸殘基GP。
??????通?？梢圆捎萌鏐eyoGold? GST-tag Purification Resin (P2251/P2253/P2255)和GST標(biāo)簽蛋白純化試劑盒(P2262)等純化本質(zhì)粒表達(dá)的目的蛋白，也可以使用GST抗體(AG768/AF0174)檢測(cè)和少量地分離純化目的蛋白。
??????pET-N-GST-PreScission質(zhì)粒的主要信息如下：
|
Feature Nucleotide
|
Position
|
|
f1 origin
|
12-467
|
|
Kanamycin resistance ORF
|
563-1645
|
|
PBR 322 origin
|
2084
|
|
LacI coding sequence
|
3518-4597
|
|
T7 promoter
|
4988-5004
|
|
GST tag coding sequence
|
5076-5732
|
|
PreScission recognition site sequence
|
5733-5756
|
|
Multiple cloning site(BamHI-XhoI)
|
5757-5804
|
|
T7 Terminator
|
5872-5918
|
??????pET-N-GST-PreScission質(zhì)粒(5943bp)的圖譜如下：
??????pET-N-GST-PreScission的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：
|
?
|
XbaI????
|
?
|
rbs???
|
NdeI???
|
|
5026??
|
AATTCCCCTC??
|
TAGAAATAAT??
|
TTTGTTTAAC??
|
|
|
????
|
|
|
|
?
|
TTAAGGGGAG
|
ATCTTTATTA
|
AAACAAATTG
|
|
|
?
|
|
?
|
GST tag
|
|
5076
|
ATGATGTCCC
|
CTATACTAGG
|
TTATTGGAAA
|
ATTAAGGGCC
|
TTGTGCAACC
|
?
|
|
|
|
|
TACTACAGGG
|
GATATGATCC
|
AATAACCTTT
|
TAATTCCCGG
|
AACACGTTGG
|
?
|
|
|
|
5126
|
CACTCGACTT
|
CTTTTGGAAT
|
ATCTTGAAGA
|
AAAATATGAA
|
GAGCATTTGT
|
?
|
|
|
|
|
GTGAGCTGAA
|
GAAAACCTTA
|
TAGAACTTCT
|
TTTTATACTT
|
CTCGTAAACA
|
?
|
|
|
|
5176
|
ATGAGCGCGA
|
TGAAGGTGAT
|
AAATGGCGAA
|
ACAAAAAGTT
|
TGAATTGGGT
|
?
|
|
|
|
|
TACTCGCGCT
|
ACTTCCACTA
|
TTTACCGCTT
|
TGTTTTTCAA
|
ACTTAACCCA
|
?
|
|
|
|
5226
|
TTGGAGTTTC
|
CCAATCTTCC
|
TTATTATATT
|
GATGGTGATG
|
TTAAATTAAC
|
?
|
|
|
|
|
AACCTCAAAG
|
GGTTAGAAGG
|
AATAATATAA
|
CTACCACTAC
|
AATTTAATTG
|
?
|
|
|
|
5276
|
ACAGTCTATG
|
GCCATCATAC
|
GTTATATAGC
|
TGACAAGCAC
|
AACATGTTGG
|
?
|
|
|
|
|
TGTCAGATAC
|
CGGTAGTATG
|
CAATATATCG
|
ACTGTTCGTG
|
TTGTACAACC
|
?
|
|
|
|
5326
|
GTGGTTGTCC
|
AAAAGAGCGT
|
GCAGAGATTT
|
CAATGCTTGA
|
AGGAGCGGTT
|
?
|
|
|
|
|
CACCAACAGG
|
TTTTCTCGCA
|
CGTCTCTAAA
|
GTTACGAACT
|
TCCTCGCCAA
|
?
|
|
|
|
5376
|
TTGGATATTA
|
GATACGGTGT
|
TTCGAGAATT
|
GCATATAGTA
|
AAGACTTTGA
|
?
|
|
|
|
|
AACCTATAAT
|
CTATGCCACA
|
AAGCTCTTAA
|
CGTATATCAT
|
TTCTGAAACT
|
?
|
|
|
|
5426
|
AACTCTCAAA
|
GTTGATTTTC
|
TTAGCAAGCT
|
ACCTGAAATG
|
CTGAAAATGT
|
?
|
|
|
|
|
TTGAGAGTTT
|
CAACTAAAAG
|
AATCGTTCGA
|
TGGACTTTAC
|
GACTTTTACA
|
?
|
|
|
|
5476
|
TCGAAGATCG
|
TTTATGTCAT
|
AAAACATATT
|
TAAATGGTGA
|
TCATGTAACC
|
?
|
|
|
|
|
AGCTTCTAGC
|
AAATACAGTA
|
TTTTGTATAA
|
ATTTACCACT
|
AGTACATTGG
|
?
|
|
|
|
5526
|
CATCCTGACT
|
TCATGTTGTA
|
TGACGCTCTT
|
GATGTTGTTT
|
TATACATGGA
|
?
|
|
|
|
|
GTAGGACTGA
|
AGTACAACAT
|
ACTGCGAGAA
|
CTACAACAAA
|
ATATGTACCT
|
?
|
|
|
|
5576
|
CCCAATGTGC
|
CTGGATGCGT
|
TCCCAAAATT
|
AGTTTGTTTT
|
AAAAAACGTA
|
?
|
|
|
|
|
GGGTTACACG
|
GACCTACGCA
|
AGGGTTTTAA
|
TCAAACAAAA
|
TTTTTTGCAT
|
?
|
|
|
|
5626
|
TTGAAGCTAT
|
CCCACAAATT
|
GATAAGTACT
|
TGAAATCCAG
|
CAAGTATATA
|
?
|
|
|
|
|
AACTTCGATA
|
GGGTGTTTAA
|
CTATTCATGA
|
ACTTTAGGTC
|
GTTCATATAT
|
?
|
|
|
|
5676
|
GCATGGCCTT
|
TGCAGGGCTG
|
GCAAGCCACG
|
TTTGGTGGTG
|
GCGACCATCC
|
?
|
|
|
|
?
|
CGTACCGGAA
|
ACGTCCCGAC
|
CGTTCGGTGC
|
AAACCACCAC
|
CGCTGGTAGG
|
?
|
|
?
|
?
|
PreScission???
|
?
|
???PstI
|
?
|
|
?
|
↓?????
|
BamHI?HindIII
|
EcoRI
|
|
|
|
|
5726
|
|
GAAGTTCTGT
|
TCCAGGGGCC
|
CGGATCCAAG
|
CTTCTGCAGG
|
?
|
|
?
|
|
CTTCAAGACA
|
AGGTCCCCGG
|
GCCTAGGTTC
|
GAAGACGTCC
|
?
|
|
?
|
?EcoRV???SalI??BglII???XhoI?
|
|
|
5776
|
AATTCGATAT
|
CGTCGACAGA
|
TCTCTCGAGT
|
GAGATCCGGC
|
TGCTAACAAA
|
?
|
|
?
|
TTAAGCTATA
|
GCAGCTGTCT
|
AGAGAGCTCA
|
CTCTAGGCCG
|
ACGATTGTTT
|
?
|
??????pET-N-GST-PreScission中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pET-N-GST-PreScission)包括：
|
AatII
|
Acc65I
|
AflII
|
AgeI
|
AhdI
|
AleI
|
AscI
|
|
AvrII
|
BaeI
|
BbvCI
|
BfuAI
|
BmgBI
|
BmtI
|
BsaI
|
|
BseRI
|
BsiWI
|
BspMI
|
BsrGI
|
Bsu36I
|
CspCI
|
EagI
|
|
Eco53kI
|
FseI
|
KpnI
|
MfeI
|
NcoI
|
NheI
|
NotI
|
|
PacI
|
PmeI
|
PmlI
|
PspXI
|
RsrII
|
SacI
|
SacII
|
|
SbfI
|
SexAI
|
SfiI
|
SnaBI
|
SpeI
|
SrfI
|
StuI
|
|
ZraI
|
??????pET-N-GST-PreScission中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pET-N-GST-PreScission once)包括：
|
DraIII
|
CAC,NNN`GTG
|
242
|
MluI
|
A`CGCG,T
|
4242
|
|
PsiI
|
TTA|TAA
|
370
|
BstAPI
|
GCAN,NNN`NTGC
|
4563
|
|
PvuI
|
CG,AT`CG
|
943
|
SphI
|
G,CATG`C
|
4771
|
|
AsiSI
|
GCG,AT`CGC
|
943
|
SgrAI
|
CR`CCGG,YG
|
4923
|
|
SmaI
|
CCC|GGG
|
1067
|
XbaI
|
T`CTAG,A
|
5034
|
|
XmaI
|
C`CCGG,G
|
1067
|
NdeI
|
CA`TA,TG
|
5074
|
|
TspMI
|
C`CCGG,G
|
1069
|
MscI
|
TGG|CCA
|
5286
|
|
NruI
|
TCG|CGA
|
1286
|
BstBI
|
TT`CG,AA
|
5476
|
|
AcuI
|
CTGAAG(N)14,NN`
|
1597
|
SwaI
|
ATTT|AAAT
|
5506
|
|
AlwNI
|
CAG,NNN`CTG
|
1729
|
ScaI
|
AGT|ACT
|
5652
|
|
BssSI
|
C`ACGA,G
|
1968
|
BamHI
|
G`GATC,C
|
5757
|
|
BstZ17I
|
GTA|TAC
|
2374
|
HindIII
|
A`AGCT,T
|
5763
|
|
Tth111I
|
GACN`N,NGTC
|
2399
|
PstI
|
C,TGCA`G
|
5769
|
|
PflFI
|
GACN`N,NGTC
|
2399
|
EcoRI
|
G`AATT,C
|
5775
|
|
PpuMI
|
RG`GWC,CY
|
3136
|
EcoRV
|
GAT|ATC
|
5783
|
|
FspI
|
TGC|GCA
|
3164
|
SalI
|
G`TCGA,C
|
5787
|
|
BglI
|
GCCN,NNN`NGGC
|
3182
|
BglII
|
A`GATC,T
|
5793
|
|
PshAI
|
GACNN|NNGTC
|
3401
|
XhoI
|
C`TCGA,G
|
5799
|
|
HpaI
|
GTT|AAC
|
3740
|
PaeR7I
|
C`TCGA,G
|
5799
|
|
BssHII
|
G`CGCG,C
|
3831
|
BlpI
|
GC`TNA,GC
|
5860
|
|
NmeAIII
|
GCCGAG(N)19,NN`
|
4041
|
StyI
|
C`CWWG,G
|
5882
|
|
BstEII
|
G`GTNAC,C
|
4060
|
??????pET-N-GST-PreScission質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
??????pET-F primer (5619-5638): 5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
??????pET-R primer (5857-5876): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
??????pET-N-GST-PreScission的全序列信息：D2916 pET-N-GST-PreScission.txt。
??????不同原核表達(dá)質(zhì)粒的比較和選擇，以及標(biāo)簽、蛋白酶切位點(diǎn)和蛋白共表達(dá)的考慮可以參考如下網(wǎng)頁(yè)：
??????http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包裝清單：
|
產(chǎn)品編號(hào)
|
產(chǎn)品名稱
|
包裝
|
|
D2916-1μg
|
pET-N-GST-PreScission
|
1μg
|
|
D2916-100μg
|
pET-N-GST-PreScission
|
100μg
|
|
—
|
說(shuō)明書
|
1份
|
保存條件：
??????-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
??????本質(zhì)粒未經(jīng)碧云天書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。