| 產(chǎn)品編號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品包裝 |
產(chǎn)品價(jià)格 |
| D7217 |
Pfu DNA Polymerase |
1000U |
130.00元 |
??????Pfu DNA Polymerase簡稱Pfu酶，是最常用的高保真DNA聚合酶之一。
??????Pfu DNA Polymerase是一種來源于嗜熱菌Pyrococcus furiosus的高度熱穩(wěn)定的DNA聚合酶。Pfu酶的分子量為90kDa。Pfu酶可以催化5’至3’方向的依賴于DNA模板的脫氧核苷酸的聚合。和Taq酶不同，Pfu酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外，Pfu酶有5’至3’外切酶活性，但Pfu酶沒有反轉(zhuǎn)錄酶活性。
??????由于Pfu酶有3’至5’的外切酶活性，因此在PCR擴(kuò)增過程中出錯(cuò)的幾率大大降低，出錯(cuò)率為2.6×10-6 per nt per cycle。
Pfu的出錯(cuò)率不僅遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于Taq酶，也低于一些其它的高保真DNA聚合酶例如Vent、DeepVent、Pwo、Tli等，因此Pfu酶常作為首選的高性價(jià)比的高保真DNA聚合酶。
??????來源：本Pfu DNA Polymerase為recombinant Pfu DNA Polymerase，通過大腸桿菌表達(dá)純化獲得，和純化獲得的天然Pfu DNA Polymerase在各方面的性質(zhì)相同。
??????用途：高保真PCR (high fidelity PCR)、點(diǎn)突變、雙平端PCR克隆等。
??????Pfu酶擴(kuò)增出來的DNA片段為雙平端，可以用于雙平端克隆，但不能用于常規(guī)的T載體克隆。
??????dUTP和dITP或含有dUTP和dITP的引物不能用于Pfu酶介導(dǎo)的PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
??????活性定義：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.
??????純度：不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，滿足常規(guī)PCR反應(yīng)要求。
??????酶儲(chǔ)存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.2), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v)
Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
??????10X Pfu Buffer (with Mg2+)：200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 20 mM MgSO4, 100 mM KCl, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。
??????失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Pfu酶失活。
包裝清單：
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產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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包裝
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D7217-1
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Pfu DNA Polymerase (5U/μl)
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1000U
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D7217-2
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10X Pfu Buffer (with Mg2+)
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1ml×5
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說明書
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1份
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保存條件：
??????-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
??????由于PCR反應(yīng)非常靈敏可以擴(kuò)增目的基因序列超過1000萬倍，在使用Pfu酶時(shí)請注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染，并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對照以確認(rèn)是否有待擴(kuò)增DNA的污染。
??????Pfu DNA polymerase在擴(kuò)增DNA片段時(shí)的出錯(cuò)率非常低，但其擴(kuò)增效率也比較低。對于出錯(cuò)率要求不高的情況，例如RT-PCR進(jìn)行定量或半定量，推薦使用Taq DNA polymerase。在擴(kuò)增效率和出錯(cuò)率需要兼顧的情況，可以選擇BeyoTaq DNA polymerase。在擴(kuò)增2kb以下DNA片段時(shí)，Pfu酶和Taq酶的擴(kuò)增效率相近。在準(zhǔn)確性要求很高的情況下，須選擇Pfu酶。
??????Pfu酶有3’至5’的外切酶活性，在沒有dNTP的情況下可以降解引物。因此Pfu酶一定要最后加入，并且要在冰浴上操作。
??????不能使用Taq酶的PCR Buffer來替代Pfu酶的PCR Buffer。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。