??????Taq DNA Polymerase簡稱Taq酶,是最常用的DNA聚合酶之一。 ??????Taq DNA Polymerase是一種來源于嗜熱菌Thermus aquaticus的高度熱穩(wěn)定的DNA聚合酶,95℃孵育時(shí)的半衰期大于40分鐘。Taq酶的分子量為94 kDa。Taq酶可以催化5’至3’方向的依賴于DNA模板的脫氧核苷酸的聚合。Taq酶沒有3’至5’的外切酶活性,有非常低的5’至3’外切酶活性。由于Taq酶沒有3’至5’的外切酶活性,因此在DNA聚合過程中相當(dāng)于核苷酸轉(zhuǎn)移酶的作用,最終會導(dǎo)致PCR產(chǎn)物的3’末端會產(chǎn)生3’-dA overhangs,即產(chǎn)生帶一個A的3’粘端。 ??????來源:本Taq DNA Polymerase為recombinant Taq DNA Polymerase,通過大腸桿菌表達(dá)純化獲得,和純化獲得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性質(zhì)相同。 ??????用途:PCR、DNA標(biāo)記和測序等。 ??????本Taq酶可以擴(kuò)增長度達(dá)5 kb的DNA片段,最長可以擴(kuò)增長達(dá)8kb的DNA片段。通常適合擴(kuò)增3kb以下的DNA片段。 ??????用本Taq酶擴(kuò)增產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物帶有3’-dA overhangs,可以用于基于T載體的PCR片段克隆。 ??????PCR反應(yīng)過程中可以摻入生物素、地高辛或一些熒光機(jī)團(tuán)標(biāo)記的脫氧核苷酸,即可以用核酸的標(biāo)記反應(yīng)。 ??????本Taq酶除用于各種PCR擴(kuò)增以及DNA標(biāo)記外,還可以用于DNA測序。 ??????活性定義:One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 70℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 67 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 6.7 mM MgCl2, 1 mM 2-mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]dTTP。 ??????純度:不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,滿足常規(guī)PCR反應(yīng)要求。 ??????酶儲存溶液:20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。 ??????10X PCR Buffer (with Mg2+):100 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 500 mM KCl, 15mM MgCl2, 0.8% (v/v) Nonidet P40。 ??????失活或抑制:酚氯仿抽提可以使Taq酶失活,加入脫氧膽酸鈉至0.06%,SDS至0.01%,或sarkosyl至0.02%均可以抑制Taq酶。 ??????本產(chǎn)品用于50微升的PCR反應(yīng)體系,足夠用于4000個反應(yīng);用于20微升的PCR反應(yīng)體系,足夠用于10000個反應(yīng)。 包裝清單:
保存條件: ??????-20℃保存。 注意事項(xiàng): ??????由于PCR反應(yīng)非常靈敏可以擴(kuò)增目的基因序列超過1000萬倍,在使用Taq酶時(shí)請注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染,并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對照以確認(rèn)是否有待擴(kuò)增DNA的污染。 ??????Taq DNA polymerase在PCR過程中每循環(huán)的出錯幾率約為2.2×10-5,對于大于1kb的DNA片段的克隆推薦使用出錯幾率更低的DNA聚合酶,例如Pfu DNA polymerase、BeyoTaq DNA polymerase等。對于普通的PCR或RT-PCR定性檢測或定量檢測,Taq DNA polymerase是選擇。 ??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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