人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基
產(chǎn)品基本信息
Applied CellTM人多能干細(xì)胞（ES/iPS）分化培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基490mL，添加劑10mL
基礎(chǔ)培養(yǎng)基2-8℃，添加劑-20～-80℃；
混勻后2-8℃，2周內(nèi)使用完畢。
人多能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化，擬胚體形成
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基是埃澤思生物科技有限公司（Applied CellTM）研發(fā)的一款適用于人多能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基可用于EB（擬胚體）的形成。擬胚體是人多能干細(xì)胞在懸浮培養(yǎng)條件下形成的球狀結(jié)構(gòu)，可用于細(xì)胞多能性檢測(cè)，形成擬胚體可驗(yàn)證細(xì)胞分化潛能。
產(chǎn)品特性
產(chǎn)品內(nèi)容
hPSC Differentiation Basal Medium
人多能干細(xì)胞分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基
hPSC Differentiation Supplement
人多能干細(xì)胞分化添加劑
相關(guān)產(chǎn)品
人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（Applied CellTM: Cat. no.AC-1001000）
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人ES細(xì)胞（Applied CellTM: Cat. no.AC-2001002）
操作方法
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基配制：
1.1 在2-8℃解凍人多能干細(xì)胞分化添加劑，輕晃搖勻；
1.2 隨后將添加劑加入到人類多能干細(xì)胞分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基中（每10mL添加劑與500mL分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基徹底混合）混勻即為人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基（AC-1001002）。人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲(chǔ)存2-3周。
注意：
1. 人多能干細(xì)胞分化添加劑只能在2-8℃解凍，可按實(shí)際用量對(duì)添加劑進(jìn)行分裝，分裝后立即使用或儲(chǔ)存于-20℃至-80℃保存。
2. 人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基使用前建議在室溫平衡10-20min，不建議在37℃加熱。
實(shí)驗(yàn)操作(以6孔板為例)
2.1 在顯微鏡下觀察人多能干細(xì)胞，確認(rèn)細(xì)胞匯合度達(dá)到70–80%，準(zhǔn)備傳代。
2.2 清洗：拿出培養(yǎng)板,吸掉原有培養(yǎng)基，沿培養(yǎng)皿邊緣緩慢加入37℃預(yù)熱PBS緩沖液，輕輕晃動(dòng)沖洗，然后吸去PBS緩沖液；
2.3 消化：在培養(yǎng)板中加入1.5mL人多能干細(xì)胞無(wú)酶消化液（AC-1001008）使之覆蓋皿
底，并置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中孵育2~5 min；
2.4 吹打：吸掉人多能干細(xì)胞消化液（AC-1001008）后，立刻加入室溫平衡好的人
多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基，用移液槍扇形吹打培養(yǎng)皿底，吹打次數(shù)保持在
3~5次，使皿底貼附的干細(xì)胞集落脫落，輕柔緩慢吹吸混勻，制成干細(xì)胞懸液；
注意：吹吸皿底細(xì)胞的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)在3~5次為宜，盡量避免形成單細(xì)胞。如有少量細(xì)胞無(wú)法從皿底脫落，屬于正?，F(xiàn)象。如有大量細(xì)胞無(wú)法從皿底脫落，需延長(zhǎng)消化時(shí)間。
3.5制備擬胚體
3.5.1懸滴培養(yǎng)法制備擬胚體
稀釋：將細(xì)胞懸液稀釋，細(xì)胞密度約為1-2×105cells/mL；
制備懸滴：將稀釋好的細(xì)胞懸液以30-50uL/滴(3000-7000 cells/滴),均勻接種在培養(yǎng)皿皿蓋內(nèi)面，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿蓋將其扣回加有PBS的培養(yǎng)皿上（加入PBS防止懸滴蒸發(fā)），放入37℃，5%CO2箱中培養(yǎng)；
3-4天后，非貼壁型培養(yǎng)皿中預(yù)先加入人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿蓋上的懸滴轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中（6cm培養(yǎng)皿加入3-4mL培養(yǎng)基)中，可觀察到明顯的擬胚體結(jié)構(gòu)，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿使擬胚體均勻分布在培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)。
3.5.2懸浮培養(yǎng)法制備擬胚體
3.6換液
換液頻率：使用懸滴法制備擬胚體,將懸滴接入非貼壁型培養(yǎng)皿繼續(xù)培養(yǎng)后，每2-3天換一次液；使用懸浮培養(yǎng)法制備擬胚體，大約在第3天形成明顯的擬胚體結(jié)構(gòu)，可進(jìn)行初次換液，后續(xù)每2-3天換一次液;
換液方法：將需換液的擬胚體懸液轉(zhuǎn)移至15mL/50mL離心管中，靜置約3min,待擬胚體沉降至管底，吸掉上清，加入室溫平衡好的人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基，用巴士滴管輕輕轉(zhuǎn)移至非貼壁型培養(yǎng)皿中，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿使之均勻分布在培養(yǎng)皿中，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
質(zhì)量控制
關(guān)鍵字： 多能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基;
上海埃澤思生物科技有限公司（ Applied Cell?）專注于治療用及生產(chǎn)用細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品研發(fā)與生產(chǎn)，目前公司產(chǎn)品已經(jīng)涵蓋干細(xì)胞、免疫細(xì)胞培養(yǎng)，凍存以及分離等領(lǐng)域。為保證產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化、一致性，我們對(duì)所有產(chǎn)品進(jìn)行嚴(yán)格的原料篩選及生產(chǎn)控制。目前，我公司已通過(guò)ISO9001：2015質(zhì)量管理體系認(rèn)證。除提供產(chǎn)品支持，本公司的技術(shù)團(tuán)隊(duì)還可為您提供及時(shí)有效的技術(shù)支持、技術(shù)咨詢，以及與您探討感興趣的科學(xué)問(wèn)題和解決方案。最終我們希望通過(guò)高品質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)，不斷推動(dòng)細(xì)胞治療、再生醫(yī)學(xué)以及藥物發(fā)展與創(chuàng)新，愿我們?cè)缛粘蔀槟谘邪l(fā)科研及應(yīng)用領(lǐng)域的忠誠(chéng)合作伙伴。
公司愿景:
我們努力成為中國(guó)細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域最頂尖產(chǎn)品與服務(wù)提供商。
公司使命: