人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基
產(chǎn)品基本信息
Applied CellTM 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基490mL，添加劑10mL
基礎(chǔ)培養(yǎng)基2-8℃，添加劑-20～-80℃；混合后2-8℃
產(chǎn)品簡介
人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基是埃澤思生物科技有限公司（Applied CellTM）自主研發(fā)的一款無外源動物成分、化學(xué)成分明確且適用于無滋養(yǎng)層培養(yǎng)的人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基。該產(chǎn)品適用于Essential 8系統(tǒng)培養(yǎng)的干細(xì)胞，可應(yīng)用于干細(xì)胞傳代，內(nèi)含干細(xì)胞保護(hù)因子，防止細(xì)胞的凋亡、分化，對細(xì)胞具有良好的保護(hù)作用。本產(chǎn)品生產(chǎn)過程遵循ISO9001體系,并符合GMP指導(dǎo)原則。
產(chǎn)品特性
產(chǎn)品內(nèi)容
hPSC Medium Basal Medium
人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基--基礎(chǔ)培養(yǎng)基
hPSC Medium Supplement
人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑
相關(guān)產(chǎn)品
即用型基質(zhì)膠（Applied CellTM: AC-1001007）
人多能干細(xì)胞消化液（Applied CellTM: AC-1001008）
Serum-Free干細(xì)胞凍存液（Applied CellTM:AC-1001011/AC-1001012）
實驗準(zhǔn)備
人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基配制
1）2-8℃解凍hPSC Medium Supplement，融化后上下晃動混勻，按實際用量進(jìn)行分裝，立即使用或儲存于-20~ -80℃，避免反復(fù)凍融；
按1:50的比例將hPSC Medium Supplement（10mL）加入到hPSC Medium Basal Medium(500mL)中，混合均勻即成為人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基。混勻后的人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基可在2-8℃ 穩(wěn)定儲存2-3周，不建議使用配制已超過3周的人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基。
實驗試劑平衡：人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基實驗前放置室溫避光平衡；PBS，消化液等37℃加熱。
注意：培養(yǎng)基中含有因子，不要37℃水浴加熱。
操作方法(以下步驟皆應(yīng)在無菌條件下操作)
hPSC細(xì)胞復(fù)蘇
1. 實驗操作步驟：
1.1 基質(zhì)膠包被培養(yǎng)板：取出6孔板/12孔板，每孔內(nèi)加入1 mL/0.5 mL即用型基質(zhì)膠（AC-1001007），輕輕晃動6孔板/12孔板使基質(zhì)膠完全覆蓋皿底，置于37℃培養(yǎng)箱中孵育1h~2h，實驗前拿出并置于超凈工作臺/生物安全柜中室溫下平衡20min。如果暫時不用，可用Parafilm封口后2-8℃ 儲存，并于1周內(nèi)使用。
注意：①一支凍存的干細(xì)胞的數(shù)量在1×106cells/mL左右，對應(yīng)6孔板1孔；②即用型基質(zhì)膠對溫度敏感，即用即拿，用完后立即放回4℃冰箱保存，且勿用手直接觸碰基質(zhì)膠液面所及的瓶身，影響基質(zhì)膠質(zhì)量。
1.2 先將2~3mL的干細(xì)胞培養(yǎng)基加入15mL離心管中備用。
1.3 解凍：將從液氮中取出的凍存管快速浸入37℃溫水中，快速搖動，使其在1~2min內(nèi)快速解凍；
注意：細(xì)胞從液氮中拿出的速度要快，盡量減少其暴露在室溫中的時間。
1.4 離心：凍存管中的凍存液解凍后，將其逐滴加入含有干細(xì)胞培養(yǎng)基的15mL離心管中，將15mL離心管置于低速離心機(jī)中配比平衡后，1000rpm離心3min；
1.5 重懸：離心后棄上清加1mL人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基對干細(xì)胞沉淀進(jìn)行吹吸混勻，吹吸3~5次左右。
1.6 接種：吹吸均勻后，將已經(jīng)平衡好的即用型基質(zhì)膠棄掉，將吹打均勻的干細(xì)胞懸液加入到已經(jīng)包被好的6孔板中，并補全每孔2mL培養(yǎng)體系。
1.7 培養(yǎng)：接種后的6孔板可以置于倒置相差顯微鏡下觀察接種的干細(xì)胞密度以及細(xì)胞團(tuán)塊大小，呈4個細(xì)胞以上的團(tuán)塊較合格，水平十字輕輕晃動6孔板/12孔板使細(xì)胞均勻分布。并置于37℃，5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第2天觀察細(xì)胞貼壁情況；
1.8 換液：從復(fù)蘇的時間開始每24h換液一次。
注意：因培養(yǎng)基中活性成分只足夠維持一天，所以每24h應(yīng)及時更換新鮮培養(yǎng)基。
hPSC細(xì)胞傳代
2. 實驗具體操作步驟：
2.1 清洗：吸掉原有培養(yǎng)基，貼壁緩慢加入1 mL PBS緩沖液并輕輕晃動，然后沿培養(yǎng)皿邊緣吸去 PBS緩沖液；
2.2 消化：在6孔板中加入2mL/孔人多能干細(xì)胞消化液（AC-1001008）使之覆蓋皿底，并置于37℃培養(yǎng)箱中2~5 min；
注意：消化時間依據(jù)干細(xì)胞生長密度，消化時間略有不同，根據(jù)經(jīng)驗一般建議時間2-5min。消化過程中可以拿到倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若在顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣以及克隆內(nèi)部細(xì)胞間出現(xiàn)間隙，即可吸掉消化液終止消化。
2.3 吹打：吸掉消化液后，加入2mL人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，用移液槍扇形吹打培養(yǎng)皿底，輕柔吹打3~5次，使皿底干細(xì)胞集落脫落，并將其并轉(zhuǎn)移到15mL離心管中；
注意：吹吸皿底細(xì)胞的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)在3~5次為宜，盡量避免形成單細(xì)胞。如有少量細(xì)胞無法從皿底脫落，屬于正?，F(xiàn)象。如有大量細(xì)胞無法從皿底脫落，需延長消化時間。
2.4 離心：1000rpm離心3min；
2.5 接種：棄上清，用干細(xì)胞培養(yǎng)基吹打細(xì)胞5-10次，吸掉包被培養(yǎng)板中的基質(zhì)膠，并將細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)板中，且補全每孔2mL的培養(yǎng)體系。
注意：吹打細(xì)胞要溫柔，并且吹打次數(shù)不要超過10次，并且
2.6 換液：從傳代的時間開始每24h換液一次。
注意：因培養(yǎng)基中活性成分只足夠維持一天，所以每24h應(yīng)及時更換新鮮培養(yǎng)基。
hPSC細(xì)胞凍存
3. 實驗具體操作步驟：
3.1 清洗：同3.2；
3.2 消化：同3.3；
3.3 吹打：同3.4；
3.4 離心：同3.5；
3.5 重懸：離心后棄上清，加入2 mL Serum-free干細(xì)胞凍存液（AC-1001011/AC- 1001012）對干細(xì)胞沉淀進(jìn)行吹吸混勻，吹吸3~5次后，將其加入到凍存管中；
注意：凍存液即用即拿，及時放回4℃冰箱。
3.6 記錄：在凍存管上標(biāo)記凍存細(xì)胞種類、時間、操作者及細(xì)胞批次。
3.7 -80℃冰箱凍存：凍存管置于-80℃冰箱過夜。
注意：凍存管放置于-80℃冰箱時，要將凍存管直立放置，切忌凍存管斜放或橫放。
3.8 液氮凍存：24小時后將-80℃冰箱中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮中長期凍存。
質(zhì)量控制
關(guān)鍵字： 多能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞培養(yǎng)基;
上海埃澤思生物科技有限公司（ Applied Cell?）專注于治療用及生產(chǎn)用細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品研發(fā)與生產(chǎn)，目前公司產(chǎn)品已經(jīng)涵蓋干細(xì)胞、免疫細(xì)胞培養(yǎng)，凍存以及分離等領(lǐng)域。為保證產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化、一致性，我們對所有產(chǎn)品進(jìn)行嚴(yán)格的原料篩選及生產(chǎn)控制。目前，我公司已通過ISO9001：2015質(zhì)量管理體系認(rèn)證。除提供產(chǎn)品支持，本公司的技術(shù)團(tuán)隊還可為您提供及時有效的技術(shù)支持、技術(shù)咨詢，以及與您探討感興趣的科學(xué)問題和解決方案。最終我們希望通過高品質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)，不斷推動細(xì)胞治療、再生醫(yī)學(xué)以及藥物發(fā)展與創(chuàng)新，愿我們早日成為您在研發(fā)科研及應(yīng)用領(lǐng)域的忠誠合作伙伴。
公司愿景:
我們努力成為中國細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域最頂尖產(chǎn)品與服務(wù)提供商。
公司使命: