Advance人多能干細胞培養(yǎng)基
產(chǎn)品基本信息
Applied CellTM Advance人多能干細胞培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基400mL，添加劑100mL
基礎(chǔ)培養(yǎng)基2-8℃，添加劑-20～-80℃；混合后2-8℃
產(chǎn)品簡介
Advance人多能干細胞培養(yǎng)基是埃澤思生物科技有限公司（Applied CellTM）自主研發(fā)的一款營養(yǎng)成分更豐富，適用于大多數(shù)多能細胞系培養(yǎng)，且適用于iPS建系。該培養(yǎng)基適用于Essential 8系統(tǒng)和mTeSR培養(yǎng)系統(tǒng)，為無滋養(yǎng)層培養(yǎng)、無血清、化學(xué)成分明確。可應(yīng)用于干細胞傳代，內(nèi)含干細胞保護因子，防止細胞的凋亡、分化，對細胞具有良好的保護作用。GMP級別生產(chǎn)車間，嚴格執(zhí)行cGMP操作標準，各項指標優(yōu)于行業(yè)標準。
產(chǎn)品特性
l 適用于E8系統(tǒng)和mTeSR系統(tǒng)培養(yǎng)的人多能干細胞
l 成分明確，批間差小
l 無需滋養(yǎng)層細胞
l 營養(yǎng)更豐富，適用于大多數(shù)細胞系培養(yǎng)，且適用重編程過程細胞培養(yǎng)
產(chǎn)品內(nèi)容
Advance hPSC Medium Basal Medium
Advance人多能干細胞培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基
Advance hPSC Medium Supplement
Advance人多能干細胞培養(yǎng)基添加劑
相關(guān)產(chǎn)品
即用型基質(zhì)膠（Applied CellTM: AC-1001007）
人多能干細胞消化液（Applied CellTM: AC-1001008）
Serum-Free干細胞凍存液（Applied CellTM: AC-1001011/AC-1001012）
實驗準備 Advance人多能干細胞培養(yǎng)基配制
1）2-8℃解凍Advance hPSC Medium Supplement，融化后上下晃動混勻，按實際用量進行分裝，立即使用或儲存于-20~ -80℃，避免反復(fù)凍融；
按1:4的比例將Advance hPSC Medium Supplement（10mL）加入到Advance hPSC Medium Basal Medium(500mL)中，混合均勻即成為人多能干細胞培養(yǎng)基。混勻后的人多能干細胞培養(yǎng)基可在2-8℃ 穩(wěn)定儲存2-3周，不建議使用配制已超過3周的人多能干細胞條件培養(yǎng)基。
實驗試劑平衡：人多能干細胞培養(yǎng)基實驗前放置室溫避光平衡；PBS，消化液等37℃加熱。
注意：培養(yǎng)基中含有因子，不要37℃水浴加熱。
操作方法(以下步驟皆應(yīng)在無菌條件下操作)
hPSC細胞復(fù)蘇
1. 實驗操作步驟：
1.1 基質(zhì)膠包被培養(yǎng)板：取出6孔板/12孔板，每孔內(nèi)加入1 mL/0.5 mL即用型基質(zhì)膠（AC-1001007），輕輕晃動6孔板/12孔板使基質(zhì)膠完全覆蓋皿底，置于37℃培養(yǎng)箱中孵育1h~2h，實驗前拿出并置于超凈工作臺/生物安全柜中室溫下平衡20min。如果暫時不用，可用Parafilm封口后2-8℃ 儲存，并于1周內(nèi)使用。
注意：①一支凍存的干細胞的數(shù)量在1×106cells/mL左右，對應(yīng)6孔板1孔；②即用型基質(zhì)膠對溫度敏感，即用即拿，用完后立即放回4℃冰箱保存，且勿用手直接觸碰基質(zhì)膠液面所及的瓶身，影響基質(zhì)膠質(zhì)量。
1.2 先將2~3mL的干細胞培養(yǎng)基加入15mL離心管中備用。
1.3 解凍：將從液氮中取出的凍存管快速浸入37℃溫水中，快速搖動，使其在1~2min內(nèi)快速解凍；
注意：細胞從液氮中拿出的速度要快，盡量減少其暴露在室溫中的時間。
1.4 離心：凍存管中的凍存液解凍后，將其逐滴加入含有干細胞培養(yǎng)基的15mL離心管中，將15mL離心管置于低速離心機中配比平衡后，1000rpm離心3min；
1.5 重懸：離心后棄上清加1mL Advance人多能干細胞培養(yǎng)基對干細胞沉淀進行吹吸混勻，吹吸3~5次左右。
1.6 接種：吹吸均勻后，將已經(jīng)平衡好的即用型基質(zhì)膠棄掉，將吹打均勻的干細胞懸液加入到已經(jīng)包被好的6孔板中，并補全每孔2mL培養(yǎng)體系。
1.7 培養(yǎng)：接種后的6孔板可以置于倒置相差顯微鏡下觀察接種的干細胞密度以及細胞團塊大小，呈4個細胞以上的團塊較合格，水平十字輕輕晃動6孔板/12孔板使細胞均勻分布。并置于37℃，5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第2天觀察細胞貼壁情況；
1.8 換液：從復(fù)蘇的時間開始每24h換液一次。
注意：因培養(yǎng)基中活性成分只足夠維持一天，所以每24h應(yīng)及時更換新鮮培養(yǎng)基。
hPSC細胞傳代
2. 實驗具體操作步驟：
2.1 清洗：吸掉原有培養(yǎng)基，貼壁緩慢加入1 mL PBS緩沖液并輕輕晃動，然后沿培養(yǎng)皿邊緣吸去 PBS緩沖液；
2.2 消化：在6孔板中加入2mL/孔人多能干細胞消化液（AC-1001008）使之覆蓋皿底，并置于37℃培養(yǎng)箱中2~5 min；
注意：消化時間依據(jù)干細胞生長密度，消化時間略有不同，根據(jù)經(jīng)驗一般建議時間2-5min。消化過程中可以拿到倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若在顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣以及克隆內(nèi)部細胞間出現(xiàn)間隙，即可吸掉消化液終止消化。
2.3 吹打：吸掉消化液后，加入2mL Advance人多能干細胞培養(yǎng)基，用移液槍扇形吹打培養(yǎng)皿底，輕柔吹打3~5次，使皿底干細胞集落脫落，并將其并轉(zhuǎn)移到15mL離心管中；
注意：吹吸皿底細胞的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)在3~5次為宜，盡量避免形成單細胞。如有少量細胞無法從皿底脫落，屬于正?，F(xiàn)象。如有大量細胞無法從皿底脫落，需延長消化時間。
2.4 離心：1000rpm離心3min；
2.5 接種：棄上清，用干細胞培養(yǎng)基吹打細胞5-10次，吸掉包被培養(yǎng)板中的基質(zhì)膠，并將細胞懸液加入到培養(yǎng)板中，且補全每孔2mL的培養(yǎng)體系。
注意：吹打細胞要溫柔，并且吹打次數(shù)不要超過10次，并且
2.6 換液：從傳代的時間開始每24h換液一次。
注意：因培養(yǎng)基中活性成分只足夠維持一天，所以每24h應(yīng)及時更換新鮮培養(yǎng)基。
hPSC細胞凍存
3. 實驗具體操作步驟：
3.1 清洗：同3.2；
3.2 消化：同3.3；
3.3 吹打：同3.4；
3.4 離心：同3.5；
3.5 重懸：離心后棄上清，加入2 mL Serum-Free干細胞凍存液（AC-1001011/AC- 1001012）對干細胞沉淀進行吹吸混勻，吹吸3~5次后，將其加入到凍存管中；
注意：凍存液即用即拿，及時放回4℃冰箱。
3.6 記錄：在凍存管上標記凍存細胞種類、時間、操作者及細胞批次。
3.7 -80℃冰箱凍存：凍存管置于-80℃冰箱過夜。
注意：凍存管放置于-80℃冰箱時，要將凍存管直立放置，切忌凍存管斜放或橫放。
3.8 液氮凍存：24小時后將-80℃冰箱中的細胞轉(zhuǎn)移至液氮中長期凍存。
質(zhì)量控制
關(guān)鍵字： 多能干細胞、多能干細胞培養(yǎng)基;
上海埃澤思生物科技有限公司（ Applied Cell?）專注于治療用及生產(chǎn)用細胞培養(yǎng)產(chǎn)品研發(fā)與生產(chǎn)，目前公司產(chǎn)品已經(jīng)涵蓋干細胞、免疫細胞培養(yǎng)，凍存以及分離等領(lǐng)域。為保證產(chǎn)品標準化、一致性，我們對所有產(chǎn)品進行嚴格的原料篩選及生產(chǎn)控制。目前，我公司已通過ISO9001：2015質(zhì)量管理體系認證。除提供產(chǎn)品支持，本公司的技術(shù)團隊還可為您提供及時有效的技術(shù)支持、技術(shù)咨詢，以及與您探討感興趣的科學(xué)問題和解決方案。最終我們希望通過高品質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)，不斷推動細胞治療、再生醫(yī)學(xué)以及藥物發(fā)展與創(chuàng)新，愿我們早日成為您在研發(fā)科研及應(yīng)用領(lǐng)域的忠誠合作伙伴。
公司愿景:
我們努力成為中國細胞培養(yǎng)領(lǐng)域最頂尖產(chǎn)品與服務(wù)提供商。
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