??????T3 RNA Polymerase,即T3 RNA聚合酶,是一種高度特異識別T3啟動子序列的DNA依賴的5'→3'RNA聚合酶。T3 RNA Polymerase可以催化單鏈或雙鏈DNA T3啟動子下游NTP的摻入,合成與T3啟動子下游的模板DNA互補(bǔ)的RNA。 ??????特點(diǎn):T3?RNA?Polymerase可以識別修飾的NTP,例如生物素標(biāo)記、地高辛標(biāo)記、熒光素標(biāo)記的NTP,可以用于各種標(biāo)記RNA的合成。同時(shí)對于T3啟動子有高度的特異性。 ??????用途:用于RNA合成,合成的RNA可以用于或用作:雜交探針,基因組DNA序列分析,核糖核酸酶保護(hù)測定(RNase protection assay),反義RNA合成,作為體外翻譯的RNA模板,RNA剪接研究的底物,RNA二級結(jié)構(gòu)和RNA-蛋白質(zhì)相互作用,核酸擴(kuò)增分析,siRNA、miRNA等小RNA。 ??????來源:由大腸桿菌表達(dá),表達(dá)基因?yàn)槭染wT3 RNA Polymerase基因。 ??????活性定義:?37℃60分鐘內(nèi),催化1nmol AMP摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。 ??????活性檢測條件:40mM Tris-HCl(pH8.0),6mM MgCl2,10mM DTT,2mM spermidine,0.5mM NTP, 0.6MBq/ml[3H]-ATP,20μg/ml plasmid DNA containing the specific T3 RNA Polymerase promoter sequence。 ??????純度:不含DNA內(nèi)切酶和外切酶,不含RNA酶。 ??????酶儲存溶液:50mM Tris-HCl(pH8.0),150mM NaCl,5mM DTT,0.1mg/ml BSA,0.5mM Elugent,50% glycerol。 ??????Transcription Buffer(5X):200mM Tris-HCl(pH7.9 at 25℃),30mM MgCl2,50mM DTT,50mM NaCl,10mM spermidine。 ??????失活或抑制:70℃加熱10分鐘可使T3?RNA?Polymerase失活。加入適量EDTA也可以使T3?RNA Polymerase失活。螯合劑、濃度大于150mM的鈉、鉀或銨鹽可以顯著抑制T3 RNA Polymerase的活性。 ??????T3的consensus promotersequence如下: ??????-15 ?-10 ??-5 ??+1 ?+5 ??????AATTAACCCTCACTAAAGGGAGA 包裝清單:
保存條件: ??????-20℃保存。 注意事項(xiàng):? ??????酶使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上,使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。 ??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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