我公司的全血microRNA(miRNA)提取試劑盒提取小RNA(＜200nt)具有操作步驟簡(jiǎn)單、重復(fù)性、產(chǎn)率較高的特點(diǎn)。核酸提取的成功與否、提取質(zhì)量的好壞對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)起著至關(guān)重要的作用。使用TRIzol試劑提取總RNA，對(duì)總RNA中包含的部分小RNA進(jìn)行研究，該方法的缺點(diǎn)是總RNA中microRNA的比例較小，同時(shí)由于mRNA的干擾，會(huì)導(dǎo)致后續(xù)反轉(zhuǎn)錄和RealTime PCR實(shí)驗(yàn)效率很低，很難獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，且結(jié)果不可靠。Biorab在探索miRNA分子功能的過(guò)程中開(kāi)發(fā)的全血miRNA提取試劑盒，通過(guò)一步上柱即可獲得純度高達(dá)98%的不含大RNA的miRNA，而且可在45分鐘內(nèi)完成小RNA的提取。該miRNA提取試劑盒廣泛適用于凍存和新鮮的抗凝全血樣本（不適用于血清和血漿），每150μl全血可獲得~1μg的microRNA。

產(chǎn)品組成：

儲(chǔ)存：室溫可保存2年。
自備試劑：異丙醇、乙醇、75%異丙醇
注意：miRNA Reagent A溶液中含有胍鹽，其具有強(qiáng)烈的腐蝕性，試驗(yàn)時(shí)請(qǐng)務(wù)必佩戴防護(hù)眼鏡、手套、口罩等防護(hù)措施，如有皮膚接觸請(qǐng)立即用大量清水沖洗，再另行就醫(yī)。

操作方法：
1．向1.5ml EP管中加入300μl miRNA Reagent A。將150μl 抗凝全血加入到上述300μl miRNA Reagent A中，立即手腕用力震蕩混合均勻。室溫靜置 5分鐘 以充分裂解細(xì)胞。
2．向上述裂解完畢的裂解液中加入250μl miRNA Reagent B，上下顛倒混合均勻。13000rpm離心5分鐘，吸取550μl上清液，轉(zhuǎn)移到新的1.5ml EP管中。
3．向上述溶液中加入200μl無(wú)水乙醇，手腕用力震蕩數(shù)次，室溫放置 5分鐘。
4．13000rpm離心10分鐘，轉(zhuǎn)移700μl上清液到新的1.5mlEP管中。
5．向上述溶液中加入300μl 異丙醇，手腕用力上下顛倒數(shù)次。
6．分兩次將上述溶液倒入到 miRNA 吸附柱中，13000rpm離心1分鐘，倒掉過(guò)濾液。
7．向吸附柱中加入700μl 75%異丙醇洗滌一次，13000rpm離心1分鐘，倒掉過(guò)濾液。
8．向吸附柱中加入500μl無(wú)水乙醇洗滌一次，13000rpm離心1分鐘，倒掉過(guò)濾液。
9．吸附柱 13000rpm 空離心2分鐘，去掉殘留的乙醇。
10．將吸附柱放入到新 1.5ml EP管中，室溫放置 2分鐘，使殘留乙醇揮發(fā)。在吸附柱濾芯上加入30μl RnaseFree TE Buffer，室溫靜置 2分鐘，13000rpm離心2分鐘，洗脫產(chǎn)物即為提取的miRNA。（通常取3～5μl該產(chǎn)物，即可使用我司TaqMan miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，貨號(hào)：MT0006）。


圖例：應(yīng)用全血miRNA提取試劑盒（MT0002）提取全血的microRNA。
 泳道1-3：-80℃凍存一年的全血；
 泳道4-6：新鮮抗凝全血。


常見(jiàn)問(wèn)題：
1．本方法提取的小 RNA，95％以上為小 RNA（<200nt），有時(shí)會(huì)殘留一些>200nt的RNA，通常殘留的>200nt RNA不影響后續(xù)試驗(yàn)操作。
2．本試劑盒提取的小 RNA 由于不含 mRNA 等大分子量的RNA，因此更適合做后續(xù)反轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)，從而進(jìn)行定量試驗(yàn)。
3．使用本試劑盒提取的microRNA 濃度通常在50ng/μl 左右，取5～10μl即可用于電泳檢測(cè)。取3~5μl即可用于我司TaqMan miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（貨號(hào)：MT0006），通常使用我司優(yōu)化的miRNA-TaqMan RealTime PCR技術(shù)（貨號(hào)：MTTxxxxx）。