細胞轉(zhuǎn)染是外源基因進入真核細胞的一種重要方法。這些外源DNA或RNA通過轉(zhuǎn)染試劑的包裝輔助,才能順利進入細胞發(fā)揮相應(yīng)的作用,進而研究其細胞功能及相應(yīng)的影響。riboFECT? CP轉(zhuǎn)染試劑是一種專門用于核酸分子的轉(zhuǎn)染試劑,極具生物相容性、轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性小,適合各種核酸分子,如siRNA、miRNA轉(zhuǎn)染實驗,不推薦用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,突出優(yōu)勢是無需進行培養(yǎng)基更換操作,尤其適合各種高通量細胞篩選實驗,方便、快速、高效。
1、高轉(zhuǎn)染效率,適用于大多數(shù)細胞的轉(zhuǎn)染實驗2、低細胞毒性,對細胞傷害小,對大多數(shù)細胞轉(zhuǎn)染均無需更換培養(yǎng)液3、操作簡單方便,可反向轉(zhuǎn)染,適合高通量篩選實驗
轉(zhuǎn)染效率對基因沉默實驗至關(guān)重要,riboFECT? CP轉(zhuǎn)染試劑極具生物相容性,能夠顯著提高siRNA、miRNA的轉(zhuǎn)染效率,保證RNAi實驗的順利進行,并能夠降低各種核酸分子使用濃度,目前已成功應(yīng)用于各種真核細胞系的核酸轉(zhuǎn)染,如HeLa、A549、293T、NIH/3T3、HepG2、HUVEC等細胞系。
圖1 分別用riboFECT? CP轉(zhuǎn)染HUVEC(A)和Hela(B)細胞,采用riboMONITOR?檢測轉(zhuǎn)染效率
圖2 用riboFECT? CP和Reagent L分別轉(zhuǎn)染p65 siRNA于HUVEC和Hela細胞,采用qPCR方法檢測其基因沉默效率。
結(jié)果顯示riboFECT? CP轉(zhuǎn)染效果更好,且隨著轉(zhuǎn)染試劑用量升高,轉(zhuǎn)染效果越好,基因沉默效率也進一步提高。
僅需簡單地將siRNA或miRNA與buffer混合后,加入riboFECT? CP形成復合物,室溫孵育0~10分鐘,再加入一定體積的培養(yǎng)液,隨后加入完全細胞培養(yǎng)基中即可,中途無需更換培養(yǎng)基。
反向轉(zhuǎn)染實驗中,先將siRNA或miRNA與riboFECT? CP混合,加至培養(yǎng)孔以形成轉(zhuǎn)染復合物,再將細胞加入至培養(yǎng)孔中進行反向轉(zhuǎn)染,以實現(xiàn)細胞高通量篩選。其中,轉(zhuǎn)染混合物制備后可保存較長時間,即允許提前準備和儲存,非常適合自動化高通量篩選系統(tǒng)。
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