本產(chǎn)品適用于體外定量檢測人血清、血漿，細胞培養(yǎng)液或其它相關(guān)生物液體中全能核酸酶含量。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分！如有疑問，請及時聯(lián)系我們。
 
試劑盒組成：

 
保存溫度：
2~8°C
特別說明：
1.打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全完整。
2.一周內(nèi)使用可存于4℃，需長時間保存或多次使用請按保存條件存放。
 
檢測原理:
本試劑盒為雙抗體夾心法檢測抗原全能核酸酶，酶標板采用高親和力抗全能核酸酶抗體作為包被物，檢測時酶標板孔加入待檢樣品或標準品，再加入生物素化抗全能核酸酶抗體,反應(yīng)后加入鏈霉親和素HRP，最后加入單組份TMB底物液。 如果待檢樣品中含有全能核酸酶，TMB底物液在HRP催化下顯色，加入終止液終止顯色后，在酶標儀OD450/OD630讀取吸光值，吸光值大小與待檢測樣品中全能核酸酶濃度呈正相關(guān)，根據(jù)標準品濃度/吸光值繪制的標準曲線，可計算出待檢樣品中全能核酸酶含量。
注意：結(jié)構(gòu)活性不佳的全能核酸酶可能不容易被本試劑盒檢出，例如原核重組表達的全能核酸酶可能無法被試劑盒檢出。
樣品收集: 
1.血清：全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。
2.血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂樣品。
3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4.細胞培養(yǎng)上清：取細胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細胞碎片。取上清檢測。
5.其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測。
6.樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。
7.樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)，或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融。
8.如果您的樣品中檢測物濃度高于標準品最高值，請根據(jù)實際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋（建議先做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù)）。
 
試驗所需自備物品:
1.酶標儀(450nm波長濾光片)
2.高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3.37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
4.吸水紙
 
檢測前準備工作:
1.請?zhí)崆?/span>20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。
2.洗滌液配制：將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應(yīng)為室溫）。當(dāng)日使用 。
3.標準品配制:濃度為5ng/mL 然后根據(jù)需要用通用稀釋液 進行1：2倍比稀釋（注：不要直接在反應(yīng)孔中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度：5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078、0pg/mL，標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL；
4.生物素標記抗全能核酸酶抗體工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），用通用稀釋液稀釋100倍，實際配制時應(yīng)多配制100-200μL；
5.鏈霉親和素HRP工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），用通用稀釋液稀釋100倍 ，實際配制時應(yīng)多配制100-200μL；
6.TMB底物液:使用前，提前放置室溫平衡。
洗滌方法:                
1.自動洗板機：每孔加入洗滌液350μL，注入與吸出間隔60秒。
2.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μL，浸泡1-2分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。
操作步驟:
實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。
1.加樣：分別設(shè)空白孔、標準品孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μL，標準品孔分別加入依次梯度稀釋標準品，待測樣品孔加待測樣品100μL，給酶標板覆膜，37℃孵育60分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μL/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。立即每孔加入配好的生物素標記的抗全能核酸酶抗體工作液100μL（在使用前15 分鐘內(nèi)配制），注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育60分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
3.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μL/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干；
4.立即每孔加入配好的鏈霉親和素HRP工作液100μL（在使用前15分鐘內(nèi)配制），注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育45分鐘；
5.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μL/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干；
6.每孔加TMB底物溶液(TMB)100μL，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右（根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當(dāng)標準孔出現(xiàn)明顯梯度時，即可終止）。
7.每孔加終止液100μL，終止反應(yīng)，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。 
8.立即用酶標儀在 450nm 波長測量各孔的光密度（OD值）。應(yīng)提前打開酶標儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。
9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
注意事項：
1.保存：試劑盒中各試劑請按說明書提示合理存放。在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染，否則可能會出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。
2.酶標板：剛開啟的酶標板孔中可能會有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。暫時不用的板條應(yīng)拆卸后放入備用鋁箔袋，按推薦溫度存放！
3.加樣：加樣或加試劑時，第一個孔與最后一個孔的加樣時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復(fù)性。每次的加樣時間最好控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔。
4.溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實驗時必須給酶標板覆膜；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，避免酶標板處于干燥狀態(tài)；嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。
5.洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在吸水紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水。在讀數(shù)前要注意清除底部殘留的液體和手指印，以免影響酶標儀讀數(shù)。
6.顯色時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如每隔5分鐘），如梯度已很明顯，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免顏色過深影響酶標儀讀數(shù)。
7.底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
8.混勻：充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，最好使用微量振蕩器(使用最低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕敲擊酶標板框混勻。
9.安全：試驗中請穿著實驗服并帶乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液樣品時，請按國家生物試驗室安全防護條例執(zhí)行。
10.不同批號的試劑盒組份不能混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）。
11.試驗中所用的EP管和吸頭均為一次性使用，嚴禁混用，否則將影響試驗結(jié)果！
結(jié)果判斷:
1.以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪制標準曲線。如有設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。
2.推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標準曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標準曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
3.若樣品OD值高于標準曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
靈敏度、檢測范圍、特異性和重復(fù)性:
●靈敏度：最小可測39pg/mL。
●檢測范圍：0.078-5 ng/mL。
●特異性：與其它蛋白無交叉反應(yīng)。
●重復(fù)性：板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
試劑盒說明：
檢測過程中可能出現(xiàn)檢測值過高超過試劑盒檢測范圍，此時應(yīng)該進一步稀釋樣本重新實驗。