簡介二硫蘇糖醇是一種常用還原劑,又叫二巰基蘇糖醇(簡稱DTT),具有很強(qiáng)的還原性,其還原性很大程度上是由于其氧化狀態(tài)六元環(huán)(含二硫鍵)的構(gòu)象穩(wěn)定性。還原力受pH值的影響,只在pH值大于7的情況下能夠發(fā)揮還原作用。這是因為只有脫去質(zhì)子的硫醇鹽負(fù)離子(-S–)才具有反應(yīng)活性,硫醇(-SH)則沒有;而巰基的pKa一般為~8.3?;瘜W(xué)性質(zhì)二硫蘇糖醇對一個典型的二硫鍵的還原是由兩步連續(xù)的巰基-二硫鍵交換反應(yīng)所組成:其中,步反應(yīng)所形成的中間態(tài)很不穩(wěn)定,因為DTT上的第二個巰基趨向于與被氧化的硫原子連接,使中間態(tài)很快被轉(zhuǎn)化為DTT的環(huán)狀氧化結(jié)構(gòu),從而完成對二硫鍵的還原。由于容易被空氣氧化,因此二硫蘇糖醇(DTT)的穩(wěn)定性較差;但冷凍保存或在惰性氣體中處理能夠延長它的使用壽命。由于質(zhì)子化的硫的親核性較低,隨著pH值的降低,DTT的有效還原性也隨之降低;而Tris(2-carboxyethyl)phosphineHCl(TCEP鹽酸鹽)可以作為低pH值條件下DTT的替代品,而且也比DTT更為穩(wěn)定。作用二硫蘇糖醇有抗氧化作用,它能保護(hù)酶分子上的還原性基團(tuán),維持還原性環(huán)境,穩(wěn)定酶的活性。DTT中還含有一定RNA酶抑制劑,具有抑制RNA酶活性的作用。具有巰基乙醇(二巰基乙醇)相似的作用,但DTT的刺激性氣味要小很多,毒性也比巰基乙醇低很多。而且DTT比巰基乙醇的濃度低7倍時,兩者效果相近。但DTT價格略高一些。用作蛋白質(zhì)琉基保護(hù)劑和蛋白質(zhì)二硫鍵的裂解和順序分析。應(yīng)用二硫蘇糖醇(DTT)是一種小分子有機(jī)還原劑,化學(xué)式為C4H10O2S2,主要應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域,作為蛋白質(zhì)裂解試劑。目前應(yīng)用最廣泛的二硫蘇糖醇合成方法是以蘇蘚糖醇為原料,先用高錳酸鉀氧化,再在硫代乙酸作用下得到硫代中間體,最后水解該硫代中間體得到二硫蘇糖醇。制備二硫蘇糖醇的新型合成方法,按產(chǎn)品理論制得量277.6g計算原料用量,包括以下步驟:a、在反應(yīng)釜中加入1,4-丁烯二醇162.5g(1.80mol),在攪拌條件下緩慢滴加液溴316.8g(1.98mol),滴加完畢后在溫度25℃條件下攪拌反應(yīng)16小時,靜置分層,取上清液,即得2,3-二溴-1,4-丁二醇,置溫度低于30℃的儲罐中儲存,備用;b、在步驟a所得上清液中,加入質(zhì)量百分濃度為30%的氫氧化鈉溶液651.2g(4.88mol),在溫度低于20℃條件下攪拌反應(yīng)16小時,即得二環(huán)氧乙烷;c、在步驟b所得反應(yīng)液中,加入硫代乙酸155.67g(2.045mol),攪拌反應(yīng)20小時,減壓蒸餾,有結(jié)晶析出,即得二硫蘇糖醇二乙酸酯;d、在步驟c所得結(jié)晶中,加入質(zhì)量百分濃度為30%的氫氧化鈉溶液190.9g(1.432mol),攪拌反應(yīng)4小時,降溫至室溫,用質(zhì)量百分濃度為3%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至7.5~8.0,用乙酸乙酯300mL萃取,合并有機(jī)層,在常壓下蒸餾除去乙酸乙酯,殘余濃縮液再在真空度為15毫米汞柱,溫度為180~200℃條件下減壓蒸餾,收集溫度在130~140℃之間的餾份,冷卻至室溫,得白色固體二硫蘇糖醇100g,產(chǎn)率36.02%。用途分子生物學(xué)。用途用于將?SH基保持在還原態(tài)的絕佳試劑;定量還原二硫化物;在SDS-PAGE前,DTT在樣品緩沖液中可有效還原蛋白二硫鍵;DTT還可用于還原交聯(lián)劑N,N′-雙(丙烯酰)胱胺的二硫鍵橋以分解聚丙烯酰胺凝膠基質(zhì);在蛋白質(zhì)序列分析中,用于清除二硫化物連接;用于考察增加的以及動態(tài)的還原反應(yīng);阻止在從大腦以及十二指腸組織中提取縮膽囊肽時,發(fā)生的氧化反應(yīng)
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