1.細胞起源:
細胞簡稱 KLE
細胞別稱 CVCL_1329
細胞背景描述 KLE細胞是源自一名64歲白人女性的子宮內(nèi)膜腫瘤組織,由G·R·Richardson于1984年建系。KLE細胞染色體為非整倍體,數(shù)目范圍在51-66之間。KLE細胞裸鼠植瘤后,其腫瘤標(biāo)本在電鏡下顯示,細胞間見緊密相連,細胞表面具有微絨毛。KLE細胞形態(tài)特征與孕激素刺激后的子宮內(nèi)膜相似。
供體年齡 女;64歲
組織來源 子宮;子宮內(nèi)膜
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
細胞類型 腫瘤細胞
腫瘤類型 宮頸癌細胞
生長特性 貼壁細胞
生物安全等級 1
2.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 DMEM/F12(PM150312)+10% FBS(164210-50)+1% P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5%
37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
液氮
3.傳代方法:
傳代步驟
1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯變圓有間隙時可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液;
6、收集細胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養(yǎng)。
消化時間 3~5分鐘
傳代比例(密度) 1:2-1:4
換液頻次 2~3次/周
倍增時間 ~114 hours
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