"KLE細胞：人子宮內膜癌細胞系
細胞背景資料：該細胞源自６４歲子宮內膜癌女性患者
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：３傳代，３-４天換液一次
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系
細胞生長特性：貼壁生長
【細胞培養(yǎng)中細菌、霉菌的污染情況總結】細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現象！可在培養(yǎng)液中加相應的抗生素處理；霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，３７度孵箱培養(yǎng)２-３天，仍清亮，但出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態(tài)變差，用酸銅溶液擦拭CO２孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的酸銅?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO２孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉移，采用擦洗孵箱(包括隔板，箱壁)。并把放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔(２月左右)，尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用８４液擦洗－清水擦洗－７５%酒精擦洗－紫外燈照。預防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加３u/ml的兩性霉素或制霉菌素或D或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或D或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞，將環(huán)境徹底消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。
懸浮細胞不容易轉染：懸浮細胞是指細胞生長不依賴支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長，如淋巴細胞。在實驗室經常會遇到懸浮細胞的轉染，其和貼壁細胞轉染還是有很大不同的。目前大多數實驗室用的是脂質體類的轉染試劑，脂質體轉染是基于電荷吸引原理，先形成脂質體-DNA復合物，散布在細胞周圍，然后通過細胞的內吞作用，將目的基因導入細胞內，而脂質體復合物與貼壁細胞的接觸機會比懸浮細胞高出很多倍，所以，脂質體轉染時懸浮細胞的轉染效率要明顯低于貼壁細胞。其次，脂質體試劑的毒性較大，這就使得懸浮細胞的轉染更為困難了。另外，懸浮細胞不易培養(yǎng)，易死亡，也給細胞轉染造成了一定的困難。為了提高懸浮細胞的轉染效率，可以使用非脂質體的轉染試劑，如納米材料的。也可以使用電轉染方法，針對懸浮細胞等難轉染細胞還是挺不錯的，電擊對細胞有一定的損傷，選用具有細胞膜修復功能的電轉染試劑，可以將電擊對細胞的傷害降到最低，懸浮細胞不易轉染，選對試劑及良好的細胞培養(yǎng)環(huán)境才是關鍵。
【胰蛋白酶消化操作】１)加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用PBS清洗(沖洗)，加入適量消化液(胰蛋白酶液)，注意消化液的量以蓋住細胞，消化溫度是３７℃；２)顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察消化細胞，若胞質回縮，細胞之間不再連接成片，表明此時細胞消化適度；(３)吸棄消化液加入培養(yǎng)液：棄去胰蛋白酶液，注意更換吸管，加入新鮮的培養(yǎng)液?！敬荡蚍稚⒓毎僮鳌浚?吹打制懸：用滴管將已經消化細胞吹打成細胞懸液；２)吸細胞懸液入離心管：將細胞懸液吸入１０ml離心管中；３)平衡離心：平衡后將離心管放入臺式離心機中，以１０００轉/分鐘離心６-８分鐘；４)棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液，加入２ml培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細胞制成細胞懸液?！痉盅b稀釋細胞操作】１)顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察細胞量，必要是計數。注意密度過小會影響傳代細胞的生長，傳代細胞的密度應該不低于５×１０５/ml。最后要做好標記；２)分裝：將細胞懸液吸出分裝至２～３個培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋；３)繼續(xù)培養(yǎng)：用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當旋松瓶蓋，放入CO２培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細胞２小時后開始貼附在瓶壁上。
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