預吸附二抗是一種經過特殊處理的二抗,其主要目的是為了降低二抗與細胞和組織樣品中的內源性免疫球蛋白發(fā)生交叉反應的風險,從而提高實驗的特異性和準確性。預吸附處理,也稱為交叉吸附,是一種額外的純化步驟,通過利用具有潛在交叉反應性的物種制備血清蛋白,使二抗混合物通過固定有這種血清蛋白的層析柱。在這個過程中,非特異性的二抗會被柱子吸附從而留在柱中,高特異性的二抗會從柱子中流穿從而被收集下來。
與普通二抗相比,預吸附二抗的主要區(qū)別在于其特異性和交叉反應性。普通二抗沒有經過預吸附處理,因此可能會與樣本中的內源性免疫球蛋白或者多標反應中其他的一抗發(fā)生交叉反應,導致非特異性的背景信號增強。而預吸附二抗由于經過了額外的處理步驟,其特異性更高,非特異性結合更少,因此在進行多色實驗或者樣本中含有內源性免疫球蛋白時,預吸附二抗是更理想的選擇。
預吸附二抗的應用主要有兩種情況:一是當樣本含有內源性免疫球蛋白時,二是在進行多色實驗時,預吸附二抗可以最大程度地降低種屬交叉反應性。此外,預吸附二抗還特別適合于單色、雙色或三色免疫組織化學(IHC)標記實驗,因為它們可以減少背景染色,提高信號的清晰度。
1、在做免疫組化或者免疫熒光時,如果一抗的宿主來源和樣本的種屬同源,比如樣本是大鼠組織,而一抗來源是小鼠,因為大鼠和小鼠屬于同源,大鼠組織中內源的IgG和一抗具有相似的序列,所以容易形成交叉污染。在選擇二抗時,最好是可以選擇排除大鼠干擾的預吸附二抗。
2、在免疫組化或者免疫熒光雙染時,為了防止兩個一抗還有樣本之間互相干擾,此時建議選擇預吸附二抗來降低非特異性干擾。
在實驗設計時,選擇正確的二抗是非常重要的。預吸附二抗由于其高特異性,可以減少非特異性背景,提高實驗結果的可靠性。Jackson為您提供近2000多種經過多重測試的高品質預吸附二抗,方便您的選擇和使用。
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