"NCI-H1688細胞：人肺癌細胞系
細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系
細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分
培養(yǎng)細胞的凍存及復蘇：細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術。細胞凍存在-１９６℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。【凍存細胞】１)選對數增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前１d換液；２)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液，計數，使細胞密度達５×１０／ml左右密度，離心，去上清；３)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑１０％二甲基亞砜(DMSO)或甘油，可使冰點降低，使細胞內水分在凍結前透出細胞外；４)分裝于無菌凍存管中，每管加１.５m懸液；５)旋好凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做好標記；６)凍存：在特殊的儀器或簡易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min時間內，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內水分透出，太慢則促進冰晶形成。操作時應戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷?！緩吞K細胞】１)從罐中取出凍存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不時搖動，使其急速融化，３０～６０s內完成；３)凍存管用７０％酒精擦拭消毒后，打開蓋子，用吸管將細胞懸液注入離心管中，再滴加１０ml培養(yǎng)液；４)低速離心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次；５)用培養(yǎng)液適當稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶３７℃培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進行培養(yǎng)。凍存細胞數量要充分，密度應達到１０／ml，在融后稀釋２０倍時，仍能保持５×１０／ml數量。
有一些細胞是數量多一點比較好生長，生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內皮細胞。而有一些是細胞是數量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好，譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞，生長速度非常得快，貼壁速度很快，所以傳代時就應該留很少量的細胞，這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長，而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候，細胞形態(tài)基本上就會差了，老化的會比較多，對后期實驗結果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞，如果細胞形態(tài)不好，（或者細胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時候進行如下操作：首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養(yǎng)基，進行預吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。（巨噬細胞建議只吹打，不消化）其次，把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個時間點，已經有部分細胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。通常稱之為“二傳”。如果一次效果還不理想，可重復多次。直到找到細胞上乘形態(tài)。其中要注意，結合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。
細胞消化過程總結：其實絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可，吸去胰酶后，殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在３７度一般不到２min足夠消化細胞（絕大部分１min不到）。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞，連續(xù)這樣傳代，對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后３７度消化。２，什么算是消化好了呢？不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經可以了，很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞，這是沒有必要的。一般能移動了，說明細胞與培養(yǎng)基質材料的附著已經消失了，細胞之間的附著也已經消失了，細胞已經獨立分布了（雖然沒有呈現很廣的離散分布）。這個時候應該停止消化，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養(yǎng)的細胞，尤其是腫瘤細胞的一個特性，無論死活的細胞都是如此，你可以嘗試，準備１００%的單個細胞懸液，貼壁后觀察細胞，仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細胞也是如此，容易聚集，不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液（不要笑，這個是初養(yǎng)懸浮細胞的人常犯的錯誤，以為懸浮培養(yǎng)就是一個一個分開）。細胞只要能從基質上脫離下來，這個時候即使是成片的（比如Calu-３細胞），吹打不超過２０次后（一般１０次即可），成小規(guī)模聚集（１０個細胞左右），是正常的，不要試圖再去延長消化時間，或者像有的同學那樣吹打１h，等待單細胞懸液出現。比較難消化的細胞（潤洗方法５min還不能消化），比如HCT１５, LS４１１和KM１２，這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般１００mm dish，一次最多加入５００ul，就足夠了，一般我加３００ul。即使這樣難消化的細胞，一般不超過５min，即可見細胞成片移動，就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候，比如tsDC細胞，但也只要用少量胰酶孵育，３min左右即可看到成片沙狀移動。
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