廣譜核酸酶，又稱全能核酸酶，是一種源于粘質沙氏菌（Serratia marcescens，又稱靈桿菌）的非特異性核酸內切酶。在功能上，它能夠剪切各種形式DNA和RNA，無論是單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀或超螺旋形式的DNA和RNA，切斷磷酸二酯鍵從而產生5’-磷酸核苷酸或5’-磷酸寡核苷酸。在之前的一期中，就有詳細介紹過廣譜核酸酶，有興趣的小伙伴不妨翻閱下之前的文章進行瀏覽~
本次，我們將為大家?guī)硪恍V譜核酸酶使用上的注意事項，讓其在實際應用過程中發(fā)揮作用吧。
1. 使用過程中，如何保持適合酶活力？
答：pH和溫度控制很重要，適宜pH在8.0，不過6-10之間也可使用，適宜活性溫度是37℃，酶活性溫度范圍0~42°C。
2. 關于存放問題，如果臨時使用會不會影響后期？
答：金普諾安廣譜核酸酶分固體與液體2款：凍干類產品非常穩(wěn)定，收到貨后于4°C干燥環(huán)境內儲存，有效期可放置3年，液體有效期為1年，打開包裝使用后，如果在 2～8oC 環(huán)境下放置超過1周時間，建議過濾除菌，防止微生物污染。
3. 樣品中含有EDTA，鹽酸胍等成分，我們需要注意什么？
答：以下常用試劑對廣譜核酸酶的活性有抑制作用，反應條件不適合容易加長反應時間，影響實驗進度，在下列濃度范圍內，即可控制廣譜核酸酶活性損失在50%以內：
4. 不同應用途徑中應該添加多少廣譜核酸酶比較合適呢？
答：具體的核酸酶添加量會根據(jù)不同的實驗用途而有所不同，以下是一些簡單參考，具體操作和數(shù)據(jù)調整還需要經過實驗驗證：
真核細胞裂解液：為了降低細胞裂解液黏度，縮短處理時間，改善分離效果，可以參考細胞數(shù)來添加。比如一般為106-107個細胞添加1μl即500單位的核酸酶。
純化后的疫苗病毒：由于DNA含量較少，可以按照萬分之一到萬分之五也就是每毫升5個單位的最終濃度加入。
5. 哪些緩沖液可以用于稀釋？
答：稀釋液緩沖液: 20 mM Tris-HCl（pH 8.0），2 mM MgCl2，20 mM NaCl。不需要無菌的可以直接加入，若有無菌要求，建議將酶用buffer稀釋，然后用0.2μm的膜除菌過濾后加入。酶被稀釋后盡快用掉，避免反復凍融。
6. 倘若反應溫度無法達到適配溫度37℃，如何保證核酸酶消化效果？
答：當反應溫度過低的情況下，推薦延長反應時間來保證消化效果。
7. 實驗過程中遇到需要蛋白變性環(huán)境，對核酸酶是否有影響？
答：在問題三中已列舉出如SDS、尿素等試劑都會影響到核酸酶的酶活影響，隨著濃度與時間的增加，核酸酶會出現(xiàn)變性失活，可通過控制抑制劑濃度范圍及提高核酸酶濃度來補償抑制因素影響。
8. 核酸酶的使用時間？
答：可以選擇在細胞收獲前、澄清后或是純化后用廣譜核酸酶處理樣品，一般選擇在收獲前或澄清后處理，可以提高病毒得率。
早期使用：可以減少大的DNA片段，并且可以在下游純化步驟中去除殘留的核酸酶。 但為了去除樣品中大量的核酸，必須使用大量的酶。
后期使用：節(jié)約了核酸酶的用量，降低成本；但必須增加一個去除廣譜核酸酶殘留的步驟，并且，采用這種方式可能會導致病毒的得率減少。
【金普諾安|廣譜核酸酶】
√ 高度穩(wěn)定性
√ 比活性大于 1000 kU/mg 蛋白
√ 無動物源性成分
√ 避免原核細胞的內毒素污染
√ 不含蛋白酶殘留
√ 供應穩(wěn)定，到貨快
廣譜核酸酶的活性受離子濃度、反應溫度及pH等因素的影響，初次使用時建議摸索適配濃度。同時，為了您的安全和健康，使用時請穿好實驗服，佩戴好防護手套等進行操作。
