背景[1-5]
人角膜上皮細(xì)胞提取物是從人原代角膜上皮細(xì)胞提取的，人原代角膜上皮細(xì)胞從正常人角膜上皮組織制備。正常人角膜上皮組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。人角膜上皮細(xì)胞提人角膜是唯一的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能。角膜包含三個不同的細(xì)胞層，外層是上皮細(xì)胞，內(nèi)層是內(nèi)皮細(xì)胞，中間層基質(zhì)層（角膜細(xì)胞）。
角膜上皮細(xì)胞能參與先天性免疫，它能感應(yīng)病原體存在并發(fā)出信號從而激活角膜防御系統(tǒng)。還能高效表達(dá)醛脫氫酶，防止UV-和4-羥基壬烯醛對細(xì)胞造成傷害。角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖是由細(xì)胞因子控制的，比如說表皮生長因子，它能激活上皮細(xì)胞深層的同源受體。體外培養(yǎng)角膜內(nèi)皮細(xì)胞已經(jīng)可以替代檢測動物眼睛的產(chǎn)物而用于毒理學(xué)檢測和人角膜上皮細(xì)胞分化的分子機(jī)制的研究。人角膜上皮細(xì)胞提取物可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖是由細(xì)胞因子控制的，比如說表皮生長因子，它能激活上皮細(xì)胞深層的同源受體。體外培養(yǎng)角膜內(nèi)皮細(xì)胞已經(jīng)可以替代檢測動物眼睛的產(chǎn)物而用于毒理學(xué)檢測和人角膜上皮細(xì)胞分化的分子機(jī)制的研究。
應(yīng)用[6][7]
可用于IL-1β誘導(dǎo)人角膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-6和IL-8的分子機(jī)制及地塞米松對其抑制作用的研究：
IL-1β誘導(dǎo)人角膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-6和IL-8的分子機(jī)制研究背景：IL-1β是一種促炎細(xì)胞因子,它在調(diào)控固有免疫反應(yīng)和適應(yīng)性免疫應(yīng)答中均發(fā)揮了重要作用。研究表明在多種角膜炎癥性疾病患者的淚液和角膜組織中,IL-1β水平有明顯升高(和正常對照比較),如單皰病毒性角膜炎、細(xì)菌性角膜炎、角膜熱/化學(xué)燒傷、胬肉和角膜移植排斥等。此外,IL-1β可以誘導(dǎo)角膜上皮細(xì)胞,角膜基質(zhì)細(xì)胞和角膜內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生多種炎癥因子,包括IL-6,IL-8,TNFa,COX2,iNOS,MCP-1,MIP-3和ICAM-1等,提示IL-1β廣泛地參與了角膜的炎癥過程。IL-6和IL-8是兩種重要的炎癥效應(yīng)分子。IL-6是多功能的細(xì)胞因子,它同時具有促炎和抗炎作用。IL-8是白細(xì)胞的趨化因子和活化因子。
正常情況下,角膜組織和淚液中幾乎檢測不到IL-6和IL-8的表達(dá)。然而,多種角膜炎癥性疾病患者的淚液和角膜組織中檢測到了IL-6和IL-8的高表達(dá)(和正常對照比較),提示這兩種炎癥細(xì)胞因子在角膜炎癥中也扮演了重要的角色。多種促炎細(xì)胞因子、細(xì)菌和病毒產(chǎn)物等都能夠快速而顯著地誘導(dǎo)IL-6和IL-8的表達(dá),其中IL-1β是其主要的誘導(dǎo)因子。
通過細(xì)胞免疫熒光染色技術(shù)檢測給予和不給予IL-1β刺激的HCECs NF-κB亞基p65的亞細(xì)胞定位以及分別單獨(dú)抑制三條MAPKs信號通路后再給予IL-1β刺激的HCECs p65的亞細(xì)胞定位；行雙熒光素酶報告基因檢測技術(shù)檢測給予和不給予IL-1β刺激的HCECs NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性及分別單獨(dú)抑制三條MAPKs信號通路后再給予IL-1β刺激的HCECs NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性。
創(chuàng)新性結(jié)論：1.p38,JNK和NF-κB信號通路介導(dǎo)了IL-1β誘導(dǎo)HCECs產(chǎn)生IL-6；2.ERK1/2,p38,JNK和NF-κB信號通路介導(dǎo)了IL-1β誘導(dǎo)HCECs產(chǎn)生IL-8；3.p38信號通路介導(dǎo)了IL-1β對HCECs NF-κB轉(zhuǎn)錄活性的上調(diào)。
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