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顯影定影試劑盒是一個(gè)用于Western blotting后續(xù)壓片后的洗片試劑。本試劑盒中的顯影和定影試劑的配方特別適合于×光片的顯影定影。

顯影定影試劑盒

顯影定影試劑盒使用方法：

1.顯影液配制：顯影液試劑A倒入燒杯中，加入500-700ml約50℃水,玻棒拌至充分溶解，再加入顯影液試劑B,玻棒攪拌至充分溶解，然后加入顯影液試劑C，玻棒攪拌至充分溶解，最后加水定容至1000 ml，玻棒攪拌混勻即可，倒入避光容器(棕或黑色瓶)中，室溫避光保存。

2.定影液配制：把定影液試劑A和試劑B倒入燒杯中，加入700ml約60℃水,玻棒攪拌至充分溶解，待冷卻后加入定影液試劑C，玻棒攪拌混勻后加水定容至1000 ml，玻棒攪拌混勻即可，倒入避光容器(棕或黑色瓶)中，室溫避光保存。

3顯影：把×光片完全浸沒(méi)在顯影液內(nèi)，顯影10秒至10分鐘。具體顯影時(shí)間視根據(jù)顯影情況而定，可以在紅燈下觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)顯影的程度已經(jīng)達(dá)到預(yù)期目標(biāo)，即可終止顯影。

4水洗：在清水中沖洗干凈，以完全除去顯影液。

5.定影：浸沒(méi)在定影液內(nèi)，定影30秒至3分鐘。定影時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)，對(duì)定影的結(jié)果沒(méi)有明顯影響。

6.水洗：在清水中沖洗干凈,以充分洗去各種殘留溶液。

顯影定影試劑盒注意事項(xiàng)

1.ECL A液和B液在吸取過(guò)程中必須要更換吸頭,A液和B液相互污染后會(huì)逐漸失效。各溶液使用后,請(qǐng)蓋緊瓶蓋,特別是B液,含有氧化劑,容易被還原而失效。

2.如果目的蛋白條帶過(guò)曝,可以縮短曝光時(shí)間,或者減少樣品、一抗及二抗的用量。

3.如果熒光迅速淬滅,可能原因是目的條帶熒光過(guò)強(qiáng),導(dǎo)致HRP迅速消耗ECL。

4.如果沒(méi)有發(fā)光信號(hào),可能是目的蛋白表達(dá)很弱,可延長(zhǎng)曝光時(shí)間。

5.金屬氧化物顆?？赡軙?huì)造成膜上出現(xiàn)顆粒狀斑點(diǎn),避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子,建議使用塑料的平頭鑷子。

6.應(yīng)使用高質(zhì)量保鮮膜。質(zhì)量較差的保鮮膜可能會(huì)淬滅熒光或由于含有雜質(zhì)而污染印跡膜造成曝光背景值偏高。

7.避免將多張膜置于同一個(gè)洗膜盒內(nèi)洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

8.疊氮化鈉(NaN3)能抑制HRP活性,若回收HRP標(biāo)記探針或者抗體應(yīng)避免使用NaN3,如必需使用勿超過(guò)0.01%。

9.本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究,不得用于臨床診斷,不得用于食品和藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。

10.為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

應(yīng)用^[4][5]

顯影定影試劑盒可以用于ADAM17和ACE2基因干預(yù)對(duì)糖尿病心臟重構(gòu)的影響及分子機(jī)制研究

探討體外實(shí)驗(yàn)中當(dāng)ADAM17和ACE2同時(shí)被抑制時(shí)心肌細(xì)胞自噬和凋亡的情況。研究方法1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的分組小鼠經(jīng)過(guò)配繁后獲得ADAM17α-MHCKO小鼠,將同窩出生的Cre陰性小鼠(ADAM17fl/fl小鼠)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的對(duì)照組。給予ADAM17fl/fl小鼠和ADAM17α-MHCKO小鼠尾靜脈注射心肌細(xì)胞特異性啟動(dòng)子cTnT驅(qū)動(dòng)的特異性敲減ACE2的九型腺相關(guān)病毒(AAV9-cTnT-shACE2)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分為4個(gè)組:ADAM17fl/fl DM+Vector組、ADAM17α-MHCKO DM+Vector組、ADAM17fl/fl DM+AAV9-shACE2組、ADAM17α-MHCKO DM+AAV9-shACE2組。2.小動(dòng)物超聲檢測(cè)小鼠心功能同論文Ⅰ部分3.小鼠組織標(biāo)本取材及病理檢查同論文Ⅰ部分4.新生大鼠原代心肌細(xì)胞(NRCMs)的提取選擇新出生的Wistar大鼠乳鼠(1d-3d)利用差速貼壁法提取原代心肌細(xì)胞。5.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的分組按照實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì),細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的分組情況如下:(1)Vehicle組;(2)GP組;(3)GP+NC-siRNA組;(4)GP+ADAM17-siRNA組;(5)GP+ACE2-siRNA組;(6)GP+ADAM17-siRNA+ACE2-siRNA組。6.Western Blot實(shí)驗(yàn)對(duì)動(dòng)物心臟組織和細(xì)胞進(jìn)行蛋白提取后進(jìn)行SDS-凝膠電泳,經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)膜、封閉、孵育一抗和二抗后進(jìn)行顯影定影試劑盒發(fā)光顯影。

參考文獻(xiàn)

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