背景及概述[1]
與DNA提取相似,RNA的分離是去除像蛋白質(zhì)或者脂類一樣的其他分子。使用有機(jī)溶劑將RNA與這些污染物分開。然而,在處理RNA時(shí)有幾個(gè)方面與DNA不同。多數(shù)細(xì)胞類型在它們的細(xì)胞質(zhì)中與mRNA并存含有大量的RNA酶,它通常是分析提取的關(guān)鍵。
提取原理[1]
為了阻止無處不在的RNA酶對mRNA的降解,分離必須即刻進(jìn)行并且細(xì)胞裂解物必須盡快置于RNA酶變性的環(huán)境中。強(qiáng)變性的異硫氰胍(GTC)可以被使用。新鮮的樣品或收集的組織可以被均漿并且大量地溶解在4mol/L的GTC溶液中。隨后RNA經(jīng)CsCl密度梯度離心沉淀并且和不能沉淀的DNA分離。接下來可用不同的方法來進(jìn)一步純化RNA。另一種方法,RNA也可以在變性鹽溶液(例如4mol/L的氯化鋰)中從均漿的組織中抽提。隨后,進(jìn)行酚抽提去除均漿物中的蛋白質(zhì),然后用醇沉淀RNA。
植物總RNA小量提取試劑盒采用高效、專一結(jié)合核酸的離心吸附柱和獨(dú)特的緩沖系統(tǒng),可從植物組織中快速提取總RNA,可從小于100mg植物組織中提取總RNA。植物總RNA小量提取試劑盒在30-60分鐘內(nèi),僅需幾個(gè)簡單的步驟,便可完成一次的抽提。植物總RNA小量提取試劑盒每次均能獲得高產(chǎn)量的高純度核酸,整個(gè)過程都是無毒性的無機(jī)物來操作,而不需用到苯酚、氯仿等有毒的有機(jī)物,不需要超速離心,只需要經(jīng)過幾次為時(shí)數(shù)分鐘的高速離心即可。
主要參考資料
[1] 分子生物技術(shù)導(dǎo)論