鈣黃綠素是一種鈣依賴(lài)型熒光分子。它主要用于研究體內(nèi)條件下的骨代謝，并有助于在體外條件下對(duì)凹陷區(qū)域進(jìn)行染色。鈣黃綠素被用于鈣的熒光測(cè)定以及鈣的EDTA（乙二胺四乙酸）滴定。鈣黃綠素通常用乙酰氧基甲基酯（例如鈣黃綠素 AM）進(jìn)行修飾以促進(jìn)膜通透性，并廣泛用作檢測(cè)活細(xì)胞的活力指示劑。它與幾種藥物相關(guān)的測(cè)定有關(guān)，包括細(xì)胞毒性、氧化功能和神經(jīng)毒性。

鈣黃綠素,AM如何工作？

鈣黃綠素 AM 是鈣黃綠素的乙酰甲氧基衍生物，是一種可透過(guò)膜的熒光酯酶底物，用于測(cè)定細(xì)胞活力和膜完整性。鈣黃綠素 AM 的親脂性使其能夠自由擴(kuò)散穿過(guò)細(xì)胞膜并滲透到活細(xì)胞的胞質(zhì)溶膠中。進(jìn)入細(xì)胞后，非特異性細(xì)胞內(nèi)酯酶會(huì)酶促去除 AM 基團(tuán)，由此產(chǎn)生的去酯化鈣黃綠素產(chǎn)物會(huì)被困在細(xì)胞內(nèi)。在藍(lán)光激發(fā)下，鈣黃綠素在 521 nm 處發(fā)出明亮的綠色熒光。鈣黃綠素的熒光強(qiáng)度與細(xì)胞酯酶的活性和樣品中存在的活細(xì)胞數(shù)量成正比。

鈣黃綠素,AM 有毒嗎？

鈣黃綠素AM的SDS表明它是一種無(wú)害物質(zhì)或混合物。在生命科學(xué)和藥物發(fā)現(xiàn)研究中，鈣黃綠素AM由于其相對(duì)較低的細(xì)胞毒性，通常用于研究酶活性、細(xì)胞活力、膜完整性和長(zhǎng)期細(xì)胞追蹤。然而，對(duì)于特定的細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)條件，高濃度的鈣黃綠素AM已被證明對(duì)細(xì)胞具有毒性。

鈣黃綠素AM是熒光的嗎？

不，鈣黃綠素 AM 是一種非熒光酯酶底物。然而，在活細(xì)胞中，鈣黃綠素 AM 可以被動(dòng)地穿過(guò)細(xì)胞膜并進(jìn)入胞質(zhì)溶膠，從而使非特異性細(xì)胞內(nèi)酯酶水解來(lái)自鈣黃綠素 AM 的乙酰氧基甲酯，從而產(chǎn)生高熒光鈣黃綠素產(chǎn)物。鈣黃綠素分別在 501 nm 和 521 nm 處具有激發(fā)和發(fā)射峰，并在激發(fā)時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)烈的綠色熒光。測(cè)得的信號(hào)強(qiáng)度與起作用的細(xì)胞酯酶的活性和存在的活細(xì)胞數(shù)量成正比。

鈣黃綠素AM在染色后可以固定嗎？

不能，無(wú)論使用何種固定方法 - 醛或甲醇固定 - 用鈣黃綠素 AM 染色的細(xì)胞都會(huì)失去其染色效果。此外，鈣黃綠素 AM 不能用于固定細(xì)胞，因?yàn)樗鼈內(nèi)狈⑩}黃綠素 AM 轉(zhuǎn)化為鈣黃綠素所需的酯酶以及保留染料所需的膜完整性。鈣黃綠素 AM 是一種熒光酯酶底物，只能用于活細(xì)胞以確定細(xì)胞活力。如需此類(lèi)實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)千萬(wàn)注意！