背景^[1-3]

人高密度脂蛋白(HDL)Elisa試劑盒是一種用于定量測(cè)定人血清、血漿或其他相關(guān)生物液體樣本中高密度脂蛋白(HDL)含量的實(shí)驗(yàn)工具。人高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的研究中，用于評(píng)估個(gè)體的血脂水平、監(jiān)測(cè)心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)等。高密度脂蛋白(HDL)是一種被認(rèn)為具有保護(hù)作用的脂蛋白，能夠?qū)⒛懝檀紡耐庵芙M織轉(zhuǎn)運(yùn)回肝臟進(jìn)行代謝和排泄，從而降低動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)。因此，通過(guò)檢測(cè)HDL的含量，可以為臨床診斷和治療提供重要的參考依據(jù)。

人高密度脂蛋白(HDL)Elisa試劑盒

一、基本信息

產(chǎn)品名稱：人高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒

檢測(cè)原理：采用雙抗體夾心ELISA酶聯(lián)免疫法，通過(guò)抗原抗體反應(yīng)和酶促顯色反應(yīng)來(lái)定量檢測(cè)樣本中的HDL含量。

樣本類型：適用于人血清、血漿、尿液、唾液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等多種樣本類型。

用途：僅供科研實(shí)驗(yàn)使用，不得用于臨床診斷。

二、產(chǎn)品規(guī)格與價(jià)格

人高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒的規(guī)格通常有48T和96T兩種，價(jià)格因品牌、供應(yīng)商及市場(chǎng)波動(dòng)而有所不同。一般來(lái)說(shuō)，價(jià)格范圍可能在幾百元至數(shù)千元之間。具體價(jià)格請(qǐng)參考各供應(yīng)商的實(shí)際報(bào)價(jià)。

三、操作步驟

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜,37℃反應(yīng)60分鐘。

3.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液）100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

應(yīng)用實(shí)例^[4][5]

人高密度脂蛋白(HDL)Elisa試劑盒可以用于載脂蛋白M對(duì)炎癥因子表達(dá)的影響及其與冠心病的易感性

apo M+HDL的分離純化及其與SR-BI結(jié)合能力檢測(cè)目的:分離HDL組分中apo M+HDL和apo M-HDL顆粒,檢測(cè)apo M+HDL和apo M-HDL顆粒在體外與SR-BI的結(jié)合能力。

方法:小鼠抗人apo M單克隆抗體通過(guò)共價(jià)結(jié)合方式不可逆的與Hi TrapNHS-activated HP 1 ml預(yù)裝柱結(jié)合,通過(guò)親和層析的方法,將HDL蛋白中apo M+HDL和apo M-HDL兩個(gè)組分分離,進(jìn)而采用BCA蛋白定量方法對(duì)分離的蛋白進(jìn)行定量分析。選取人單核細(xì)胞株THP-1細(xì)胞經(jīng)體外PMA、ox-LDL誘導(dǎo),再經(jīng)apo M–HDL、apo M+HDL、重組人apo M蛋白于37℃培養(yǎng)箱中分別孵育6 h,收集細(xì)胞并提取總蛋白,用抗SR-BI的單克隆抗體沉淀蛋白復(fù)合物后進(jìn)行Western blot檢測(cè)。通過(guò)免疫共沉淀方法檢測(cè)apo M+HDL、apo M-HDL和重組apo M蛋白在THP-1細(xì)胞表面與SR-BI的相互作用。使用人高密度脂蛋白(HDL)Elisa試劑盒檢測(cè)apo M+HDL、apo M-HDL的含量。

人高密度脂蛋白(HDL)Elisa試劑盒結(jié)果:人高密度脂蛋白HDL經(jīng)Hi Trap NHS-activated HP柱子純化,分別收集流出液(apo M–HDL)、洗脫液(apo M+HDL),apo M抗體進(jìn)行Dot blot及western檢測(cè),結(jié)果顯示,在未經(jīng)純化的HDL蛋白、純化后第一、二、三管洗脫液中均能檢測(cè)到apo M蛋白,流出液(apo M–HDL)組分中未檢測(cè)到apo M蛋白。apo M–HDL、apo M+HDL蛋白經(jīng)透析后定量,終濃度分別為3.23 mg/ml和0.34 mg/ml,總體積為6.2ml和3.5ml。PMA處理THP-1細(xì)胞,其表面SR-BI的表達(dá)會(huì)有升高約10%左右,免疫共沉淀結(jié)果顯示,apo M–HDL、apo M+HDL孵育組的總蛋白經(jīng)SR-BI抗體沉淀復(fù)合物中均能檢測(cè)到SR-BI和HDL蛋白,重組人apo M孵育組的總蛋白經(jīng)SR-BI抗體沉淀復(fù)合物中也能檢測(cè)到SR-BI和apo M蛋白。結(jié)論:經(jīng)HDL蛋白成功分離apo M–HDL和apo M+HDL兩種蛋白成分。證實(shí)THP-1細(xì)胞表面apo M–HDL、apo M+HDL和重組人apo M與SR-BI蛋白之間存在相互作用。

參考文獻(xiàn)

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