簡(jiǎn)述

堿性藍(lán) 17又名甲苯胺藍(lán)O，3-氨基-7-(二甲基氨基)-2-甲基酚噻嗪-5-鎓氯化物，縮略表達(dá)為TBO，其分子式與分子量分別為C₁₅H₁₆ClN₃S，305.83。常溫常壓下，堿性藍(lán) 17可以穩(wěn)定存在，呈藍(lán)色至深綠色粉末狀物質(zhì)，有古銅色光澤。溶于水(3.82g/100ml)，呈藍(lán)紫色溶液，微溶于乙醇(0.57g/100ml)呈藍(lán)色，極微溶于氯仿，幾乎不溶于乙醚。

使用分光光度法研究了溶劑極性，溫度和pH對(duì)堿性藍(lán) 17(TBO)顏色和吸收光譜的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，溶劑極性，染料的聚集作用，不同pH條件產(chǎn)生的染料分子質(zhì)子化或OH加合物可造成染料顏色和λmax變化。實(shí)驗(yàn)也證明TBO在堿性條件下不產(chǎn)生脫甲基產(chǎn)物，所產(chǎn)生的不穩(wěn)定OH加合物對(duì)苯萃取TBO的過(guò)程有催化作用，而在此過(guò)程中OH加合物發(fā)生離解[1]。

應(yīng)用

堿性藍(lán) 17是一種生物異染染料、氧化還原指示劑，適用于各種組織學(xué)染色，特別是肥大細(xì)胞和軟骨細(xì)胞。作為一種堿性的醌亞胺染料，堿性藍(lán) 17可以高度結(jié)合組織內(nèi)的酸性物質(zhì)，將細(xì)胞核染成藍(lán)色，多糖染成紫色，并提高組織玻片染色圖像的清晰度。

組織學(xué)染色

以正常育齡婦女子宮內(nèi)膜為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本，在光鏡下觀察放置節(jié)育環(huán)與未置節(jié)育環(huán)的子宮內(nèi)膜中肥大細(xì)胞的數(shù)量及其分布情況，為探討節(jié)育環(huán)出血機(jī)理的研究提供依據(jù)。用傳統(tǒng)的染色技術(shù)，如堿性藍(lán) 17(單方)，奧辛藍(lán)芷紅，中性紅等染色方法，均難顯示子宮內(nèi)膜中的肥大細(xì)胞，而且其染色時(shí)間長(zhǎng)，染色很不穩(wěn)定。為此，對(duì)堿性藍(lán) 17方法進(jìn)行了配方的改進(jìn)，可以取得較理想的結(jié)果。改進(jìn)后的染色方法配方簡(jiǎn)單，使用方便，染出的肥大細(xì)胞結(jié)構(gòu)清楚，顏色鮮艷[2]。

核糖核酸測(cè)定

實(shí)驗(yàn)研究吩噻嗪類染料堿性藍(lán) 17與DNA作用的共振光散射光譜，在pH 10～11的范圍內(nèi)，加入DNA導(dǎo)致堿性藍(lán) 17共振光散射增強(qiáng)，在 350nm處存在一共振光散射增強(qiáng)峰，其強(qiáng)度與DNA濃度呈線性關(guān)系。據(jù)此可以建立一種測(cè)定DNA的共振光散射法，用于合成樣品中DNA的測(cè)定[3]。

電化學(xué)

用循環(huán)伏安法在玻碳電極上電沉積一層穩(wěn)定的堿性藍(lán) 17聚合物膜，研究這層膜在0.2mol/L磷酸緩沖溶液(pH6.86)中的電化學(xué)性質(zhì)，并且考察了該膜修飾的玻碳電極對(duì)煙酰胺輔酶(NADH)的電催化作用，用旋轉(zhuǎn)圓盤電極測(cè)量了NADH在該修飾電極上的催化反應(yīng)常數(shù)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在該修飾電極上，NADH氧化峰電位比未修飾的玻碳電極負(fù)移了450mV，且其催化反應(yīng)速率常數(shù)為3.5×10³L·mol^-1·s^-1，說(shuō)明堿性藍(lán) 17聚合物膜對(duì)NADH有良好的電催化作用[4]。

光敏劑

以牙周病病人下前牙區(qū)取齦上菌斑為反應(yīng)材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在相同的光波長(zhǎng)、光劑量、光強(qiáng)度和光照時(shí)間下，1.0mg/mL的堿性藍(lán) 17的滅菌效果最好，滅菌率為79%。也就是說(shuō)，以甲苯胺藍(lán)為光敏劑的光動(dòng)力療法對(duì)齦上菌斑有滅菌作用[5]。

有關(guān)研究

阪崎腸桿菌（又叫阪崎克羅諾桿菌，Cronobacter sakazakii，C.sakazakii）主要存在于食品如蔬菜、奶酪、肉和奶粉中，能夠?qū)е聥胗變耗谭鄹腥臼录陌l(fā)生。實(shí)驗(yàn)采用比濁法、平板計(jì)數(shù)法研究阪崎腸桿菌在玻璃表面生物膜形成影響因素及超聲波對(duì)其去除作用效果；采用堿性藍(lán) 17為光敏劑，運(yùn)用響應(yīng)面對(duì)阪崎腸桿菌生物膜的光動(dòng)力滅菌技術(shù)條件進(jìn)行優(yōu)化；通過(guò)激光共聚焦顯微鏡和掃描電子顯微鏡直接觀察光動(dòng)力對(duì)阪崎腸桿菌生物膜細(xì)胞的損傷效果及形態(tài)變化；研究殼聚糖對(duì)阪崎腸桿菌生物膜形成的抑制作用及對(duì)光動(dòng)力滅菌效果的影響。

主要研究結(jié)果如下：（1）培養(yǎng)條件可影響阪崎腸桿菌生物膜的形成。在37℃，pH 7.5，鹽度2.5%的條件下有利于阪崎腸桿菌生物膜的形成；CaCl₂（0.50%）、MgCl₂（1.50%）對(duì)阪崎腸桿菌生物膜形成具有明顯促進(jìn)作用；Cu²⁺（1.50%）、EDTA（2.5%）對(duì)阪崎腸桿菌生物膜形成具有抑制作用。（2）超聲波處理對(duì)阪崎腸桿菌生物膜去除作用效果顯著。超聲波處理能夠使玻璃表面上附著的阪崎腸桿菌生物膜脫落，超聲波處理初始溫度30℃，時(shí)間14 min條件下去除效果最好。激光共聚焦顯微鏡可直接觀察到超聲波處理后蓋玻片上阪崎腸桿菌生物膜活菌數(shù)量變化，可證實(shí)和評(píng)價(jià)超聲處理對(duì)玻璃表面阪崎腸桿菌生物膜的去除效果。（3）堿性藍(lán) 17介導(dǎo)的光動(dòng)力滅菌技術(shù)對(duì)阪崎腸桿菌生物膜滅活作用效果顯著。通過(guò)響應(yīng)面曲線分析，篩選出優(yōu)化的光動(dòng)力滅菌條件為：孵育時(shí)間20.5 min，堿性藍(lán) 17濃度56μg/mL，光照時(shí)間30.5 min，活菌數(shù)Log10（CFU/cm²）的理論值為3.44。（4）激光共聚焦顯微鏡能從菌的熒光顏色觀察光動(dòng)力對(duì)阪崎腸桿菌生物膜細(xì)胞的滅菌效果。當(dāng)光照時(shí)間延長(zhǎng)時(shí)，細(xì)胞表征出較多的紅色熒光，表明滅活效果顯著。掃描電子顯微鏡可顯示出滅菌后細(xì)胞形態(tài)變化，使用響應(yīng)面優(yōu)化的條件對(duì)阪崎腸桿菌生物膜進(jìn)行滅菌后，細(xì)胞內(nèi)陷，且部分細(xì)胞會(huì)破損并有內(nèi)容物溶出。（5）殼聚糖對(duì)阪崎腸桿菌生物膜的形成具有明顯的抑制作用。同時(shí)，殼聚糖對(duì)已成熟的生物膜具有一定的破壞作用。殼聚糖可以促進(jìn)堿性藍(lán) 17的滲透作用，增大滅菌效果。

因此，將殼聚糖與光動(dòng)力滅菌技術(shù)聯(lián)用可能開(kāi)發(fā)成一種能有效去除生物膜的滅菌技術(shù)，并應(yīng)用于食品領(lǐng)域。堿性藍(lán) 17介導(dǎo)的光動(dòng)力滅菌技術(shù)可有效控制阪崎腸桿菌生物膜，與其相關(guān)的光動(dòng)力滅菌技術(shù)對(duì)食品安全尤其是乳制品加工安全具有潛在應(yīng)用價(jià)值[6]。

參考文獻(xiàn)

[1]賈海順,劉愛(ài)國(guó).溶劑極性和pH對(duì)甲苯胺藍(lán)O溶液的影響[J].北京師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版, 1994, 30(2):4.DOI:CNKI:SUN:BSDZ.0.1994-02-019.

[2]楊建平.甲苯胺藍(lán)顯示子宮內(nèi)膜肥大細(xì)胞的改進(jìn)染色法[J].中華生殖與避孕雜志, 1987(1):75-75.

[3]肖錫林,王永生,李貴榮,等.甲苯胺藍(lán)共振光散射法測(cè)定納克級(jí)脫氧核糖核酸[J].光譜學(xué)與光譜分析, 2004, 24(2):4.DOI:10.3321/j.issn:1000-0593.2004.02.019.

[4]袁軍華,陳艷玲,王修中,等.煙酰胺輔酶在聚甲苯胺藍(lán)膜修飾的玻碳電極上的電催化氧化[J].分析化學(xué), 2004, 32(001):53-55.DOI:10.3321/j.issn:0253-3820.2004.01.013.

[5]欒秀玲,秦艷利,白雪峰,等.甲苯胺藍(lán)為光敏劑的光動(dòng)力療法對(duì)齦上菌斑滅菌效果的研究[J].牙體牙髓牙周病學(xué)雜志, 2008.DOI:CNKI:SUN:YTYS.0.2008-02-010.

[6]楊璐環(huán).阪崎腸桿菌生物膜形成影響因素及甲苯胺藍(lán)O光動(dòng)力滅菌作用研究[D].暨南大學(xué),2019.DOI:10.27167/d.cnki.gjinu.2019.000188.