背景^[1-3]

BCAP-37人乳腺癌細胞是一種來源于48歲女性乳癌患者的人乳腺癌細胞系。這些細胞具有上皮細胞樣的形態(tài)，并且在培養(yǎng)中表現(xiàn)為貼壁生長的特性。

細胞特性：

細胞形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長；

細胞活力：通常高于90%，具體數值可能因供應商和批次不同而有所差異；

污染檢測：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性，確保細胞的無菌狀態(tài)。

BCAP-37人乳腺癌細胞廣泛應用于科學研究領域，包括但不限于以下幾個方面：

乳腺癌發(fā)病機制研究：通過BCAP-37細胞系，可以研究乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展機制以及相關的基因表達和信號通路。

藥物篩選與評估：BCAP-37細胞系可用于抗癌藥物的篩選和評估，幫助研究人員發(fā)現(xiàn)新的治療靶點和藥物。

細胞生物學研究：BCAP-37細胞系還可用于細胞生物學的基本研究，如細胞增殖、分化、凋亡等過程的調控機制。

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：常用培養(yǎng)基包括DMEM（高糖）+10%FBS，也有文獻提及使用RPMI-1640（w/o Hepes）+10%胎牛血清。具體培養(yǎng)基配方可能因供應商和實驗需求而有所不同。

培養(yǎng)溫度與氣體環(huán)境：37℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

傳代方法：首次傳代建議比例為1:2-1:3，之后可根據細胞生長情況調整傳代比例至1:3~1:6。傳代時通常使用胰蛋白酶進行消化，使細胞脫壁后重新接種到新的培養(yǎng)瓶中。

BCAP-37人乳腺癌細胞

BCAP-37人乳腺癌細胞培養(yǎng)操作

1)復蘇BCAP-37人乳腺癌細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2)BCAP-37人乳腺癌細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)BCAP-37人乳腺癌細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應用^[4][5]

BCAP-37人乳腺癌細胞可以用于去甲斑蝥素誘導的人乳腺癌細胞系Bcap-37的凋亡作用及其相關機制的研究

利用細胞體外培養(yǎng)技術,研究去甲斑蝥素(noncantharidin,NCTD)誘導BCAP-37人乳腺癌細胞凋亡的可能機制。

方法：采用MTT法檢測NCTD對BCAP-37人乳腺癌細胞24h和48h的生長抑制作用,篩選藥物最適濃度和最佳作用時間；AO/EB雙染法、形態(tài)學觀察來分析NCTD誘導乳腺癌細胞Bcap-37的凋亡變化；DNA凝膠電泳、彗星實驗探討細胞DNA的損傷情況；激光共聚焦顯微鏡技術檢測NCTD對線粒體膜電位、細胞內活性氧等自由基以及Hsp70、Caspase-3蛋白表達的影響,并用流式細胞術分析NCTD誘導Bcap-37細胞凋亡與細胞周期變化的關系。

結果：1.BCAP-37人乳腺癌細胞MTT檢測結果表明,NCTD在體外具有抑制Bcap-37細胞增殖的作用,降低細胞的存活率(p<0.01),具有明顯的量效和時間依賴性,其最佳濃度在10μg/ml左右；AO/EB染色后,通過熒光顯微鏡可觀察到細胞凋亡的形態(tài)特征,如細胞變圓、胞膜褶皺、核碎裂等,并出現(xiàn)凋亡小體。

2. BCAP-37人乳腺癌細胞流式細胞儀檢測結果表明,NCTD可使G1期細胞比例明顯降低,S期和G2/M期細胞比例升高,細胞凋亡率上升。通過DNA瓊脂糖凝膠電泳和彗星實驗表明,一定濃度的NCTD能夠對Bcap-37細胞的DNA造成損傷,發(fā)生拖尾現(xiàn)象,并可見以約200bp為基數的DNA片斷組成的“梯狀”條帶。

3. NCTD可刺激BCAP-37人乳腺癌細胞線粒體膜電位ΔΨm降低,使細胞內ROS含量升高,并同時增強H2O2的生成,抑制CAT酶的活性。

4. NCTD作用24h后的細胞與對照組比較,抑癌基因蛋白Caspase-3的表達上調,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.01)；熱休克蛋白Hsp70的表達隨藥物濃度的變化而變化,與其對腫瘤細胞的雙重調節(jié)功能吻合。

結論：1.NCTD對BCAP-37人乳腺癌細胞有較強的抑制增殖作用,呈時間-劑量效應關系；凝膠電泳結果可見細胞凋亡的典型DNA“梯狀”條帶和“彗星”拖尾現(xiàn)象。2.NCTD誘導Bcap-37細胞凋亡的機制與其干擾細胞周期有關,并呈現(xiàn)細胞周期阻滯現(xiàn)象。3.細胞內ROS含量增加,線粒體膜電位下降,顯示線粒體氧化損傷途徑可能是NCTD促進Bcap-37細胞凋亡的機制之一。4.NCTD通過調節(jié)Caspase-3、Hsp70蛋白的表達來實現(xiàn)誘導BCAP-37人乳腺癌細胞的凋亡說明NCTD能影響癌細胞某些基因的表達并改變酶的生理活性,從而發(fā)揮其抗腫瘤作用。

參考文獻

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[2]Norcantharidin inhibits DNA replication and induces apoptosis with the cleavage of initiation protein Cdc6 in HL-60 cells[J].Jin-Long Li;;Yu-Chen Cai;;Xu-Hui Liu;;Li-Jian Xian.Anti-Cancer Drugs,2006(3)

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[4]Mylabris phalerlata induces apoptosis by caspase activation following cytochrome c release and Bid cleavage[J].Jeong-Eun Huh;;Kyung-Sun Kang;;Kyoo-Seok Ahn;;Dong-Hee Kim;;Ikuo Saiki;;Sung-Hoon Kim.Life Sciences,2003(17)

[5]尹璇.去甲斑蝥素誘導的人乳腺癌細胞系Bcap-37的凋亡作用及其相關機制的研究[D].山東理工大學,2010.