背景[1-7]
酸性磷酸酶檢測試劑盒是一種用于快速、便捷地檢測細胞或組織樣品的裂解或勻漿產(chǎn)物的上清液、血漿、血清、尿液等樣品中內(nèi)源性的酸性磷酸酯酶活性的試劑盒。酸性磷酸酶(Acid Phosphatase)，也稱酸性磷酸酯酶，是一種在溶酶體中含量較高的酸性水解酶，被認為是鑒定溶酶體亞細胞組分的標志物。酸性磷酸酶是一個蛋白家族，哺乳動物中其分子量從18kD到100kD不等。酸性磷酸酶分為兩類，一類為酒石酸鹽敏感型，一類為氟離子敏感型。溶酶體中的酸性磷酸酶為酒石酸鹽敏感型，而紅細胞和巨噬細胞中的酸性磷酸酶為氟離子敏感型。
血漿中的酸性磷酸酶活性范圍在2-7.9U/L，血清中酸性磷酸酶的活性范圍在2.5-11.7U/L。精液(semen)中含有高濃度的酸性磷酸酯酶，活力可以達到87-436KU/L。酸性磷酸酶能在酸性條件下脫去磷酸酯的磷酸基團.人體內(nèi)存在多種酸性磷酸酶同工酶，它們在血清中的濃度可以用來作為診斷相應(yīng)器官的疾病重要參數(shù).前列腺酸性磷酸酶過高可能暗示前列腺處有腫瘤，而高水平的抗酒石酸酸性磷酸酶則有可能意味著骨癌的風(fēng)險.因此檢測相應(yīng)組織細胞中酸性磷酸酶的活性具有重要的意義。
檢測原理：Para-nitrophenyl phosphate(pNPP)是一種常用的磷酸酶顯色底物，在酸性條件下，可在酸性磷酸酶作用下生成para-nitrophenol。para-nitrophenol(p-nitrophenol)在堿性條件下，呈黃色產(chǎn)物，可以在400-415nm檢測吸光度。產(chǎn)物黃色越深，說明酸性磷酸酶檢活性越高，反之則酶活性越低。據(jù)此通過比色分析就可以計算出酸性磷酸酶活性水平。
注意事項：
1.如果希望進行酶活性的絕對定量，進行酶反應(yīng)時必須注意精確計時。此時推薦采用孵育30分鐘等較長的時間，以減小操作過程中的時間誤差。同時如果樣品中酶活性較高，則可以預(yù)先適當稀釋樣品。
2.樣品溶液中須避免出現(xiàn)各種酸性磷酸酶抑制劑。
3.一管顯色底物配制后需當日使用完畢，因此請注意適當多準備一些樣品一起檢測，以避免試劑盒浪費。
4.p-nitrophenol溶液對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。反應(yīng)終止液有腐蝕性，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或腐蝕其他物品。
應(yīng)用[8-9]
酸性磷酸酶檢測試劑盒可用于酸性磷酸酶法檢測腫瘤細胞的增殖狀態(tài)
以細胞漿中酸性磷酸酶活力和細胞增殖之間具有緊密關(guān)系為依據(jù),確定細胞數(shù)目與酸性磷酸酶活力之間的相關(guān)性,建立96孔板微量測定方法,同時運用流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡,確定凋亡細胞與酸性磷酸酶的關(guān)系,并與噻唑蘭(MTT)方法進行靈敏度的比較。結(jié)果在2種肝癌細胞株(HepG2細胞和CBRH 7919細胞)中,酸性磷酸酶的活力與細胞數(shù)目呈正比關(guān)系,在(0.5～7)×10 3細胞數(shù)范圍內(nèi)呈直線關(guān)系,二者相關(guān)系數(shù)(CV)達0.994;在佛波酯(TPA)刺激肝癌細胞1h后,酸性磷酸酶的活力即顯著上升。
相反在三氧化二砷作用后,酸性磷酸酶的活力即顯著下降,濃度越高,下降越顯著。三氧化二砷作用HepG2細胞2 4h,凋亡細胞僅占3.98%,作用CBRH 7919細胞,在還沒有出現(xiàn)凋亡時,酸性磷酸酶的活力即已顯著下降。結(jié)論檢測細胞的酸性磷酸酶活力可作為細胞增殖和凋亡的指標,此方法簡便、快速,可用于大批量抗腫瘤藥物的篩選。
參考文獻
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