背景及概述^[1]

高通量基因編輯技術(shù)幫助人們實現(xiàn)了“編輯生命”的愿望，常規(guī)的基因編輯自身存在的局限性限制了其廣泛應用，此前人們的研究熱情也多集中在編輯的效率、準確性與安全性，但常規(guī)的基因編輯技術(shù)在一個反應中僅能對一個或數(shù)個基因進行操作，且通常會在基因組中留下額外的不需要的序列修改，在大型研究中，常規(guī)的基因編輯遠遠無法滿足大量不同基因的編輯需求。高通量基因編輯可以一次編輯數(shù)百種基因。

編輯方法^[1]

哈佛大學George Church教授領導的研究團隊開發(fā)了一種基于CRISPR-Cas9的新型高通量基因編輯方法：guide+donor，該方法可以在單個釀酒酵母中同時精確改變數(shù)百個不同基因，編輯效率達到80％至100％，還能在生物體內(nèi)選擇特定行為細胞，進行定向基因編輯和修復。guide+donor除幫助構(gòu)建大型文庫外，還能進行基因功能分析，發(fā)現(xiàn)一些未知的基因突變和功能。Church表示，新的方法不僅能夠更高效、更準確地在酵母中進行高通量“功能基因組學”研究，還能模擬、檢測酵母細胞中與特定性狀或功能紊亂相關(guān)的低頻基因突變，并找出哪些與疾病實際相關(guān)。此外，該方法除了可以在龐大的基因家族中挖掘新的基因和功能外，還能研究基因組中的非編碼序列，提高我們對基因調(diào)控和染色體生物學的理解。技術(shù)優(yōu)勢：在一個反應中快速構(gòu)建大型DNA變異文庫；在一個反應中同時提供guide和donor，防止無效修復和非生產(chǎn)性修復；含有g(shù)uide+donor組合的質(zhì)?？梢宰鳛樽粉櫥蚓庉嫾毎莫毺貤l形碼，利用NGS技術(shù)可以進行高通量分子表型鑒定。

主要參考資料

[1] High-throughput creation and functional profiling of DNA sequence variant libraries using CRISPR–Cas9 in yeast