背景[1-3]
pRb1細(xì)胞是指那些表達(dá)Rb1基因（也稱(chēng)為pRb基因）的細(xì)胞。Rb1基因編碼的蛋白質(zhì)pRb1是一個(gè)關(guān)鍵的細(xì)胞周期調(diào)控因子，通過(guò)與E2F轉(zhuǎn)錄因子家族的成員相互作用來(lái)抑制細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期。這種調(diào)控機(jī)制確保了細(xì)胞在分裂前能夠完成必要的生長(zhǎng)和修復(fù)過(guò)程。
在正常的細(xì)胞中，pRb1蛋白通過(guò)抑制E2F轉(zhuǎn)錄因子的活性來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng)控制。然而，在某些情況下，如癌癥中，Rb1基因可能會(huì)發(fā)生突變或缺失，導(dǎo)致pRb1蛋白的失活或表達(dá)減少。這種情況下，細(xì)胞失去了對(duì)E2F的抑制，導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)度增殖，進(jìn)而可能發(fā)展成為腫瘤。
pRb1細(xì)胞在研究中通常用于研究Rb1基因的功能、細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制以及癌癥的發(fā)生和發(fā)展。通過(guò)操縱pRb1的表達(dá)或活性，科學(xué)家們可以深入了解其在細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂中的重要作用，并可能為癌癥治療提供新的思路和方法。
pRb1
pRb1細(xì)胞系培養(yǎng)操作
1)復(fù)蘇pRb1細(xì)胞系：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)pRb1細(xì)胞系傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)pRb1細(xì)胞系凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
應(yīng)用[4-5]
pRb1細(xì)胞可以用于基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及生物信息學(xué)分析鑒定復(fù)發(fā)性鼻息肉相關(guān)的基因與通路
基于高通量測(cè)序技術(shù)通過(guò)對(duì)復(fù)發(fā)性鼻息肉組織m RNA差異性比較,篩選與復(fù)發(fā)性鼻息肉的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的mRNA,尋找潛在的復(fù)發(fā)性鼻息肉的作用靶點(diǎn),為臨床用藥提供依據(jù)。
方法:1.選取10例復(fù)發(fā)性鼻息肉患者的鼻息肉組織,pRb1細(xì)胞以及10例鼻中隔偏曲、鼻骨骨折患者的正常鼻甲黏膜標(biāo)本進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。
2. 使用Illumina Nova Seq6000測(cè)序儀,選用PE150模式對(duì)上述標(biāo)本進(jìn)行測(cè)序。使用edge R對(duì)上述兩組測(cè)得的reads進(jìn)行比對(duì),篩選出pRb1細(xì)胞差異表達(dá)基因(篩選條件:q-value<=0.05,Fold-change>=2)。3.將上述基因在GO和KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行GO和KEGG富集分析以及蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析。
結(jié)果:本研究通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序共檢出32797個(gè)基因,其中實(shí)驗(yàn)組相對(duì)對(duì)照組的差異表達(dá)基因有552個(gè),GO富集分析顯示這些差異基因參與了STAT蛋白入核等生物過(guò)程,與免疫突觸等細(xì)胞組分有關(guān),與趨化因子受體活性等分子功能有關(guān)。KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)性鼻息肉的發(fā)生發(fā)展可能與原發(fā)性免疫缺陷、粘蛋白型O-聚糖生物合成、唾液分泌等通路密切相關(guān)。之后,我們還構(gòu)建了蛋白互作網(wǎng)絡(luò),并篩選出了節(jié)點(diǎn)度最高的中樞基因PTPRC,并發(fā)現(xiàn)其與原發(fā)性免疫缺陷通路密切相關(guān),可能是治療鼻息肉的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。
結(jié)論:1.利用全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及多種生物信息學(xué)工具,我們對(duì)復(fù)發(fā)性鼻息肉的基因表達(dá)譜進(jìn)行了全面的分析,確定了如CD37、pRb1細(xì)胞、MUC7、PTPRC等與復(fù)發(fā)性鼻息肉作用機(jī)制相關(guān)幾個(gè)關(guān)鍵基因,原發(fā)性免疫缺陷、粘蛋白型O-聚糖生物合成、唾液分泌等與復(fù)發(fā)性鼻息肉作用機(jī)制相關(guān)的信號(hào)通路。2.通過(guò)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析,我們認(rèn)為,PTPRC可能是復(fù)發(fā)性鼻息肉發(fā)生的一個(gè)潛在的重要因子。3.本研究結(jié)果可能為復(fù)發(fā)性鼻息肉患者的治療策略提供新的視角,然而,需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)和大樣本量的額外研究來(lái)證實(shí)這些發(fā)現(xiàn)。
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