背景技術(shù)

近年來，在藥物研發(fā)市場，大分子生物藥所受到的關(guān)注度越來越高。包括多肽、蛋白質(zhì)、抗體、聚糖與核酸等在內(nèi)的大分子生物藥物多用于治療腫瘤、艾滋病、心腦血管病、肝炎等重大疾病.其中的多肽藥物，因具有合成工藝成熟、純度高、穩(wěn)定性較好及副作用小等優(yōu)勢(shì)，已被廣泛應(yīng)用于多種治療領(lǐng)域。氫化乳清酸是合成多肽藥物中用到的關(guān)鍵物料，它有兩種構(gòu)型，分別為L-氫化乳清酸和D-氫化乳清酸。本文建立了新的高效液相色譜法用于測定L-氫化乳清酸中異構(gòu)體的含量，該方法可有效地分離兩種構(gòu)型的氫化乳清酸并進(jìn)行異構(gòu)體的含量測定，為優(yōu)化合成工藝、制定雜質(zhì)控制策略及提高樣品純度提供支持依據(jù)。

檢測方法

1、色譜條件

色譜柱為CHIRALPAKQD-AX（4.6mm×150mm，5pm），流動(dòng)相為甲醇-乙腈-乙酸-三乙胺（體積比50：50：2：0.2），流速為0.5mL/min，檢測波長為245nm，柱溫25℃，進(jìn)樣量為50uL。

2、溶液配制

分別取L-氫化乳清酸與D-氫化乳清酸各適量，加甲醇-水(體積比為1：1)超聲溶解，并稀釋制成每1mL中分別約含L-氫化乳清酸2mg與D-氫化乳清酸6ug的混合溶液，作為供試品溶液。

3、專屬性

取供試品溶液50uL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，專屬性測定結(jié)果顯示，L-氫化乳清酸與D-氫化乳清酸能達(dá)到良好分離，分離度3.0。

4、檢測限

稱取D-氫化乳清酸適量，用溶劑逐步稀釋至一定濃度并進(jìn)樣檢測，以信噪比(S/N)約為3時(shí)的質(zhì)量濃度作為檢測限質(zhì)量濃度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本品的檢測限為0.7μg/mL。

5、重復(fù)性

按照“實(shí)驗(yàn)方法”項(xiàng)供試品溶液的配制方法，平行配制6份溶液，考察方法的重復(fù)性，測定結(jié)果顯示供試品溶液中D型異構(gòu)體含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（n=6）為6.9%，方法重復(fù)性良好。

6、耐用性

分別調(diào)整流速、柱溫、流動(dòng)相比例，取供試品溶液分別進(jìn)樣，記錄色譜圖.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，D-氫化乳清酸和L-氫化乳清酸的分離度均大于1.5。由此確認(rèn)當(dāng)測定條件有微小變動(dòng)時(shí)，異構(gòu)體分離不受影響。

7、溶液穩(wěn)定性

取D-氫化乳清酸和L-氫化乳清酸適量，按照供試品溶液的配制方法配制溶液，并按“實(shí)驗(yàn)方法”項(xiàng)所述色譜條件，于25℃分別在第0，2，6，10，14，18，22，24h進(jìn)樣，穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，待測溶液室溫放置24h，D型異構(gòu)體質(zhì)量分?jǐn)?shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（n=8）為2.2%，表明待測溶液室溫放置24h內(nèi)穩(wěn)定。

參考文獻(xiàn)

[1]李音卓,江竹蓮,徐翠玲,等. HPLC法測定L-氫化乳清酸中異構(gòu)體的含量[J]. 淮海工學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）,2017,26(4):31-33. DOI:10.3969/j.issn.1672-6685.2017.04.008.