背景[1-7]
PUMA Rabbit Polyclonal Antibody（PUMA兔多克隆抗體）用PUMA作為抗原刺激兔機(jī)體，產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng)，由機(jī)體的漿細(xì)胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組免疫球蛋白。PUMA Rabbit Polyclonal Antibody是通過(guò)分子生物學(xué)方法構(gòu)建了重組PUMA的表達(dá)載體,并誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)PUMA抗體的大量表達(dá)。該重組蛋白以可溶性形式存在,經(jīng)親和柱純化后對(duì)家兔進(jìn)行免疫,得到PUMA抗體(兔多抗)。
PUMA刺激機(jī)體，產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng)，由機(jī)體的漿細(xì)胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組免疫球蛋白，這種與抗原有特異性結(jié)合能力的免疫球蛋白就是抗體。一般而言，抗體按靶位點(diǎn)不同主要分為單克隆抗體和多克隆抗體，由多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，受到多種抗原決定簇刺激并可以與多種抗原表位結(jié)合的抗體就是多克隆抗體。
多抗一般制備流程：完全抗原的準(zhǔn)備→兔子的免疫→效價(jià)檢測(cè)和終放→抗體親和純化→抗體的濃縮和保存。PUMA的表達(dá)受腫瘤抑制基因p53的調(diào)節(jié)。PUMA參與由多種信號(hào)誘導(dǎo)的p53依賴性和非依賴性細(xì)胞凋亡，并且受轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)，而不是通過(guò)翻譯后修飾?；罨?，用PUMA抗凋亡相互作用的Bcl-2家族成員，從而釋放Bax蛋白和/或Bak的其然后能夠發(fā)送信號(hào)的細(xì)胞凋亡的線粒體。繼線粒體功能障礙時(shí)，胱天蛋白酶級(jí)聯(lián)被激活，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
生化研究表明PUMA與抗凋亡Bcl-2家族成員如Bcl-xL，Bcl-2，Mcl-1，Bcl-w和A1相互作用，抑制它們與促凋亡分子Bax和Bak的相互作用。當(dāng)它們的抑制被解除時(shí)，它們導(dǎo)致Bax的易位和線粒體功能障礙的激活，導(dǎo)致線粒體凋亡蛋白細(xì)胞色素c，SMAC和凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）的釋放，導(dǎo)致胱天蛋白酶活化和細(xì)胞死亡。因?yàn)镻UMA對(duì)結(jié)合Bcl-2家族成員具有高親和力，另一個(gè)假設(shè)是PUMA直接激活Bax和/或Bak，并且通過(guò)Bax多聚化觸發(fā)線粒體易位并且其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。然而，各種研究表明，PUMA不依賴于與Bax/Bak的直接相互作用來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
應(yīng)用[8]
PUMA兔多克隆抗體可用于細(xì)胞凋亡通路研究：
PUMA、Bim是Bcl-2蛋白家族BH3-only亞家族中重要的促凋亡基因,在多種因素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡啟動(dòng)和多種疾病的發(fā)生過(guò)程中都發(fā)揮著重要的作用。目前尚沒(méi)有PUMA、Bim在過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞系HLEC-B3凋亡中作用的相關(guān)報(bào)道,探討PUMA、Bim對(duì)人晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的作用及其誘導(dǎo)表達(dá)的途徑和機(jī)制,進(jìn)一步闡明白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制,可以為基因治療提供前期的理論依據(jù)。
JNK信號(hào)通路參與了多種生理和病理過(guò)程,激活后的JNK能激活包括轉(zhuǎn)錄因子在內(nèi)的多種效應(yīng)蛋白,產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。C-jun是JNK的主要下游因子,編碼的蛋白產(chǎn)物可以構(gòu)成轉(zhuǎn)錄因子AP-1,轉(zhuǎn)錄因子AP-1是細(xì)胞內(nèi)JNK/SAPK作用的重要目標(biāo)。在活化條件下,JNK磷酸化c-jun,并增加其轉(zhuǎn)錄活性,c-jun蛋白可以根據(jù)不同的細(xì)胞類型決定誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或者抑制細(xì)胞凋亡。
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