背景技術(shù)
作為抗衰領(lǐng)域最熱門的分子之一，煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)毫不例外的成為了歷代抗衰物質(zhì)的中心。NAD+是超過500種酶促反應(yīng)所需的一種重要輔酶，因其在氧化和還原中的作用而眾所周知。其中煙酰胺單核苷酸(NMN)被認(rèn)為是當(dāng)前最合適的NAD+前體，且目前NMN正在全球市場(chǎng)上熱銷，備受消費(fèi)者的青睞。
NMNH中文名稱為“還原型煙酰胺單核苷酸”或“還原型β? 煙酰胺單核苷酸”，是NMN的還原形式，是一種補(bǔ)充NAD+的新前體，具有比NMN更好的NAD+促進(jìn)作用以及其他的生物學(xué)功能如增加細(xì)胞抗氧化能力、減少脂肪積累、減少炎性反應(yīng)和抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)等，是一種具有顯著商業(yè)潛力的健康促進(jìn)試劑(WO2021098725A1)。
還原型煙酰胺單核苷酸的合成工藝市場(chǎng)上還處于實(shí)驗(yàn)室研發(fā)階段，還不能實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，主要技術(shù)難點(diǎn)：1)還原型煙酰胺單核苷酸是NMN的還原形式，容易被空氣氧化；2)在實(shí)驗(yàn)室只有通過制備色譜的方法才能得到純度較高的水溶液，且需通過凍干的方法才能得到無定型固體，這種方法對(duì)產(chǎn)品無提純效果，凍干得到的無定型固體為泡沫狀、流動(dòng)性差、容易吸潮變?yōu)橛汀⒔到饪欤?)尚未有多晶型物報(bào)道。眾所周知，工業(yè)上非必要不選用凍干技術(shù)，因?yàn)閮龈尚枰吆哪芮耶a(chǎn)能受限；無定型固體能量比晶體固體高、更不穩(wěn)定。
制備方法
還原型煙酰胺單核苷酸二鈉鹽的制備：往2.85升Tris?HCl(50mM)溶液中加入179mg MnCl2，調(diào)溶液pH為8.0，控溫在37℃。向溶液中加入143mg大腸桿菌 (EcNADD)的NAD+焦磷酸酶，加入10g NADH，攪拌2小時(shí)。用制備色譜分離得到NMNH溶液，用NaOH調(diào)溶液pH至10，減壓濃縮得到3.8g 還原型煙酰胺單核苷酸二鈉鹽固體。
1、晶型A的制備：稱取500mg 還原型煙酰胺單核苷酸二鈉鹽，溶于1ml水中，在20?40℃用氮?dú)獯祾?，析出晶體后過濾，得固體于鼓風(fēng)烘箱干燥。所得固體晶型為晶型A，水分(KF)為27％。
2、晶型B的制備：稱取50g已制得的還原型煙酰胺單核苷酸二鈉鹽晶體(晶型A)，真空干燥2?4小時(shí)。所得固體晶型為晶型B，水分(KF)為16％。
3、晶型C的制備：稱取20g已制得的還原型煙酰胺單核苷酸二鈉鹽晶體(晶型B)，真空干燥10?20小時(shí)。所得固體晶型為晶型C，水分(KF)為11％。
參考文獻(xiàn)
[1] 音芙醫(yī)藥科技(上海)有限公司. 還原型β-煙酰胺單核苷酸二鈉鹽的多晶型及其制法和用途:CN202210168280.1[P]. 2022-11-22.
[2] 可勞邁戴斯有限公司. 煙酰胺核苷、煙酸核苷、還原型煙酰基核苷化合物和煙?；塑栈衔镅苌镌谥破返挠猛?CN202080029936.0[P]. 2021-11-30.