背景[1-7]
外泌體膜標記熒光試劑盒是利用被熒光標記的親脂性的染料和膜滲透型的化合物對對分離的外泌體進行體外標記或活體示蹤的科研試劑盒。Exosome（外泌體）是由活細胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；參與細胞之間的交流，物質(zhì)的運輸以及正常生理過程的維持，此外還與疾病的產(chǎn)生有關(guān)。
外泌體膜標記熒光試劑盒根究標記物染色方法有以下幾種：
1. 親脂性染料:PKH-67（green）/PKH-26（red）
染料可以穩(wěn)定的與細胞膜脂質(zhì)區(qū)結(jié)合并發(fā)出熒光，主要用于細胞體外標記、體外細胞增殖研究以及體內(nèi)外的細胞失蹤研究。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期，標記在兔紅細胞上的PKH26半衰期長達100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內(nèi)細胞跟蹤研究。
2. 親脂性羰花青染料（carbocyanine dyes）:DiI/DiD/DiO/DiR
DiI,DiO,DiD,DiR是一系列親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。這些環(huán)境敏感性熒光染料在進入細胞膜之前熒光非常弱，當與細胞膜結(jié)合后其熒光強度大大增強。且具有消光系數(shù)高、極性依賴性、激發(fā)態(tài)壽命短等特點。一旦進入細胞膜后，可在整個細胞膜上擴散，濃度時可以使整個細胞膜染色。
外泌體膜標記熒光試劑盒根究標記方法有以下幾種：
1.CFSE：
羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯，常稱為CFSE，可被動擴散進入細胞。這種試劑沒有顏色和熒光，直至細胞內(nèi)的酯酶去除其醋酸鹽基團，產(chǎn)生能發(fā)出明亮熒光的羧基熒光素琥珀酰亞胺酯。琥珀酰亞胺酯與細胞內(nèi)氨基反應，形成穩(wěn)定且能用醛固定劑固定的熒光偶聯(lián)物。
2.Calcein-AM：
在傳統(tǒng)的Calcein（鈣黃綠素）基礎(chǔ)上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細胞膜。一旦進入細胞后，Calcein-AM（本身不發(fā)熒光）被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein，從而被滯留在細胞內(nèi)并發(fā)出強綠色熒光。
3.利用外泌體表面的巰基（thiol group）對外泌體進行標記
應用[8]
外泌體膜標記熒光試劑盒僅限在用于外泌體相關(guān)的科研研究:
在血漿外泌體源性miR-122-5p和miR-300-3p作為診斷大鼠短暫性腦缺血發(fā)作潛在標記物的研究中以血漿外泌體源性rno-miR-122-5p和rno-miR-300-3p在大鼠短暫性腦缺血發(fā)作的標記物。用外泌體膜標記熒光試劑盒對大鼠大腦中動脈阻塞模型中的血漿外泌體源性miR-122-5p和miR-300-3p進行檢測。
參考文獻
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