背景^[1-6]

翻譯后修飾(Post-translational modification,PTM)是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進行共價加工的過程。它通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團，可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學性質(zhì)，進而影響蛋白質(zhì)的空間構象和活性狀態(tài)、亞細胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動研究中具有重大意義，異常的翻譯后修飾會導致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化，因此只要我們知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的精確變化,翻譯后修飾組學服務能幫助您對任何翻譯后修飾方式進行鑒定和定量。

應用^[7][8][9]

1.磷酸化修飾組學服務

蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡單、靈活、可逆的特性，以及磷酸基團的供體ATP的易得性，使得磷酸化修飾被真核細胞所選擇接受成為一種最普遍的調(diào)控手段。

蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化這一可逆過程，幾乎調(diào)節(jié)著包括細胞的增殖、發(fā)育、分化、細胞骨架調(diào)控、細胞凋亡、神經(jīng)活動、肌肉收縮、新陳代謝及腫瘤發(fā)生等生命活動的所有過程，并且可逆的蛋白質(zhì)磷酸化是目前所知道的最主要的信號轉導方式。目前已經(jīng)知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起，而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導致的后果。

2.蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學技術服務

乙?；揎検求w內(nèi)高度保守的可逆轉的蛋白修飾，對細胞核內(nèi)轉錄調(diào)控因子的激活有著非常重要的作用。此外，還存在大量的非組蛋白乙?；揎梾⑴c了代謝通路及代謝酶活性的調(diào)節(jié)。乙?；揎椊M學技術服務采用肽段預分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙酰化鑒定的影響，再結合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙酰化的肽段，從而實現(xiàn)大規(guī)模乙?；蔫b定及定量。

3.蛋白質(zhì)泛素化修飾組學技術服務

泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外，泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位，調(diào)控包括細胞周期、細胞凋亡、轉錄調(diào)控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內(nèi)的多種細胞活動。

4.蛋白質(zhì)糖基化修飾組學技術服務

糖基化是在酶的控制下,蛋白質(zhì)或脂質(zhì)附加上糖類的過程,發(fā)生于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等部位。在糖基轉移酶作用下將糖轉移至蛋白質(zhì),和蛋白質(zhì)上的氨基酸殘基共價結合。蛋白質(zhì)經(jīng)過糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是對蛋白的重要的修飾作用,有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能作用。

凝素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學中應用最廣泛的分離富集方法。凝集素（lectin）是一類糖結合蛋白質(zhì)，能專一識別某一特殊結構的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結合，它們與糖鏈可逆非共價結合，糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后，通常用特定的單糖通過競爭結合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來。

蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用凝集素（lectin）富集N-糖基化肽段，然后用N-糖酰胺酶（PNGase）在H218O中切除連接在天冬酰胺殘基（Asn）上的糖鏈。該處理致使Asn分子量增加2.9890Da。最后用高精度LC-MS質(zhì)譜儀檢測脫糖后的肽段，并通過MASCOT軟件檢索數(shù)據(jù)庫，確認脫糖后分子量與其理論分子量的變化以及糖基化修飾肽段的序列，從而確定該蛋白質(zhì)的N-糖基化位點。

5.其他修飾服務

利用質(zhì)譜對蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式進行鑒定和定量的基本原理是蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,質(zhì)譜就是利用這個分子量的變化值將磷酸化修飾的肽段與非磷酸化修飾的肽段分辨出來。只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的精確變化,該服務就能幫助您對這種新的翻譯后修飾方式進行鑒定和定量。

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