背景^[1-5]

蛋白免疫原性分析服務(wù)可提供針對(duì)機(jī)體在使用生物藥后產(chǎn)生的抗藥抗體和中和抗體進(jìn)行免疫原性實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)，旨在全力幫助客戶加快推進(jìn)藥物研發(fā)項(xiàng)目的進(jìn)展的技術(shù)性服務(wù)。提供的免疫原性檢測(cè)主要通過(guò)分步方法來(lái)進(jìn)行抗藥抗體的評(píng)估和中和抗體的檢測(cè)。其中，步主要集中于對(duì)結(jié)合在樣品上的抗藥抗體進(jìn)行檢測(cè)。在篩選出抗藥抗體并確認(rèn)其特異性結(jié)合后，對(duì)抗體濃度進(jìn)行評(píng)估，從而完成對(duì)抗藥抗體的定量。針對(duì)中和抗體活性的免疫原性檢測(cè)是通過(guò)細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)或配體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)完成的。

免疫原性是指能夠刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)形成特異抗體或致敏淋巴細(xì)胞的性質(zhì)。免疫原性的評(píng)價(jià)與生物藥研發(fā)緊密相關(guān)。生物療法涉及到的蛋白質(zhì)、抗體，偶聯(lián)多肽和寡聚核苷酸能夠誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生有害的免疫反應(yīng)，導(dǎo)致抗藥抗體（Anti-Drug Antibody,ADAs）的產(chǎn)生，這類抗體會(huì)潛在威脅到病人的生命安全（引起過(guò)敏，自身免疫等不良反應(yīng)）。其中，具有中和能力的抗藥抗體被稱作中和抗體（Neutralizing Antibody,NAbs）。中和抗體能夠通過(guò)抑制生物藥的生物活性進(jìn)而減弱其藥效。免疫原性檢測(cè)分為對(duì)抗藥抗體和中和抗體的檢測(cè)評(píng)價(jià)兩個(gè)部分。

服務(wù)類型^[6][7]

2.抗藥抗體 （Anti-Drug Antibody, ADA）檢測(cè)

免疫系統(tǒng)可能會(huì)通過(guò)產(chǎn)生抗藥抗體而對(duì)這些生物分子做出反應(yīng)。抗藥抗體會(huì)對(duì)藥物暴露、藥物毒性作用、藥物代謝動(dòng)力學(xué)、藥物效應(yīng)動(dòng)力學(xué)等造成影響。因此，在臨床前研究和臨床研究中，開(kāi)發(fā)可靠的、能夠有效評(píng)估抗藥抗體反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)方法顯得尤為重要。對(duì)抗藥抗體的評(píng)估涉及多步驟的分析過(guò)程，其中包含廣泛的實(shí)驗(yàn)形式以及方法學(xué)。

抗藥抗體的完整性分析評(píng)估主要包括以下幾個(gè)步驟：

1.抗藥抗體的篩選實(shí)驗(yàn)：篩選實(shí)驗(yàn)?zāi)軌虼_認(rèn)樣品中抗藥抗體的存在。常見(jiàn)的方法包括直接或橋接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），電化學(xué)發(fā)光（ECL）或放射免疫測(cè)定分析（RIA）。非特性背景（NSB）通常是通過(guò)檢測(cè)未處理動(dòng)物在不同時(shí)間點(diǎn)的多組血清樣品來(lái)測(cè)定的，得到的這個(gè)NSB數(shù)據(jù)可以作為抗藥抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)分界點(diǎn)。

2.抗藥抗體驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：篩選出來(lái)的陽(yáng)性樣本必須通過(guò)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析進(jìn)而排除任何的假陽(yáng)性結(jié)果。

3.抗藥抗體鑒定實(shí)驗(yàn)：經(jīng)過(guò)確認(rèn)的陽(yáng)性樣本將會(huì)被進(jìn)一步確認(rèn)其在結(jié)合親和性、亞型及其他方面的特性。

2.中和抗體（Neutralizing Antibody, NAbs）檢測(cè)

中和抗體：宿主對(duì)抗原或病毒感染的常規(guī)反應(yīng)是產(chǎn)生抗體，它與病毒結(jié)合而使其失活（中和）。中和抗體針對(duì)治療藥蛋白或多肽能夠顯著降低其藥效，因此中和抗體檢測(cè)是免疫原性檢測(cè)中是很關(guān)鍵的一個(gè)部分。

通常，美國(guó)食品藥物管理局（FDA）認(rèn)為生物實(shí)驗(yàn)?zāi)芨诱鎸?shí)的反映出體內(nèi)的環(huán)境狀況。對(duì)于中和抗體的檢測(cè)，生物實(shí)驗(yàn)應(yīng)該與作用機(jī)理相關(guān)，否則通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)對(duì)中和抗體的臨床效果進(jìn)行評(píng)價(jià)將不能提供充分的信息。中和實(shí)驗(yàn)的開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證具有一定難度，并且在不同的樣本間存在顯著變化。

然而，細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)由于在認(rèn)識(shí)患者對(duì)藥物蛋白免疫反應(yīng)的重要性上起著關(guān)鍵作用，所以仍然被推薦使用。細(xì)胞水平上的中和抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)涉及到細(xì)胞在受到藥物或藥物所抑制的配體刺激所引發(fā)的胞內(nèi)信號(hào)通路，或者也可能與在細(xì)胞表面所發(fā)生的胞外結(jié)合事件相關(guān)。在我們常見(jiàn)的細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)中，最常用的數(shù)據(jù)讀取方法包括細(xì)胞增殖，生物標(biāo)記，報(bào)告基因表達(dá)，抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒素（ADCC）等實(shí)驗(yàn)。

參考文獻(xiàn)

[1] Leroux-Roels G.(2011)."Vaccine development".Perspectives in Vaccinology.1(4):115–150.doi:10.1016/j.pervac.2011.05.005.PMID 19348557.

[2] De Groot A.S.;Scott D.W.(2007)."Immunogenicity of protein therapeutics".Trends in Immunology.28(11):482–490.

[3] Baker M.P.;et al.(October 2010)."Immunogenicity of protein therapeutics".Self Nonself.1(4):314–322.

[4] Baker,M.P;Reynolds,H.M;Lumicisi,B;Bryson,C.J(2010)."Immunogenicity of protein therapeutics:The key causes,consequences and challenges".Self/nonself.1(4):314–322.

[5] Jawa,Vibha;AS Degroot;L Cousens;M Awwad;H.Kropshofer;E.Wakshull(December 2013)."T-cell dependent immunogenicity of protein therapeutics:Preclinical assessment and mitigation".Clinical Immunology.149(3):534–555.

[6] 高柳村,李黎,王緒甲,陳方,董立厚,歐倫,宋海峰.ELISA法測(cè)定食蟹猴血清中抗BLyS抗體的抗藥抗體[J].中國(guó)新藥雜志,2016,25(01):50-55.

[7] 盛慧英.普通人群血清中的腺病毒中和抗體調(diào)查及3型腺病毒中和表位的鑒定和分析[D].南方醫(yī)科大學(xué),2013.