背景[1-3]
RECOMBINANT HUMAN P53 MUTANT細(xì)胞腫瘤抗原P53突變型是重組人P53突變型蛋白。RECOMBINANT HUMAN P53 MUTANT細(xì)胞腫瘤抗原P53突變型是將智人P53突變型基因?qū)胝婧吮磉_(dá)體系（酵母）進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)生的具有免疫源性的重組蛋白。
P53基因是迄今發(fā)現(xiàn)與人類(lèi)腫瘤相關(guān)性最高的基因。在短短的十多年里，人們對(duì)P53基因的認(rèn)識(shí)經(jīng)歷了癌蛋白抗原，癌基因到抑癌基因的三個(gè)認(rèn)識(shí)轉(zhuǎn)變，現(xiàn)已認(rèn)識(shí)到，引起腫瘤形成或細(xì)胞轉(zhuǎn)化的P53蛋白是P53基因突變的產(chǎn)物，是一種腫瘤促進(jìn)因子，它可以消除正常P53的功能，而野生型P53基因是一種抑癌基因，它的失活對(duì)腫瘤形成起重要作用。
RECOMBINANT HUMAN P53 MUTANT細(xì)胞腫瘤抗原P53突變型免疫組化
P53基因在人類(lèi)、猴、雞和鼠等動(dòng)物中相繼發(fā)現(xiàn)后，對(duì)其進(jìn)行了基因定位，人類(lèi)P53基因定位于17P13.1，鼠P53定位于11號(hào)染色體，并在14號(hào)染色體上發(fā)現(xiàn)無(wú)功能的假基因，進(jìn)化程度迥異的動(dòng)物中，P53有異常相似的基因結(jié)構(gòu)，約20Kb長(zhǎng)，都由11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子組成，第1個(gè)外顯子不編碼，外顯子2、4、5、7、8、分別編碼5個(gè)進(jìn)化上高度保守的結(jié)構(gòu)域，P53基因5個(gè)高度保守區(qū)即第13～19、117～142、171～19 2、236～258、270～286編碼區(qū)。
P53基因轉(zhuǎn)錄成2.5KbmRNA，編碼393個(gè)氨基酸蛋白，分子量為53KD，P53基因的表達(dá)至少受轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后二種水平的調(diào)控.在停泊生長(zhǎng)或非轉(zhuǎn)化細(xì)胞中P53mRNA水平很低，但刺激胞液后mRNA顯著增加.持續(xù)生長(zhǎng)的細(xì)胞，其mRNA水平不隨細(xì)胞周期而出現(xiàn)明顯變化，但經(jīng)誘導(dǎo)分化后mRNA水平降低，部分是轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。
P53基因的轉(zhuǎn)錄由P1、P2二個(gè)啟動(dòng)子控制.P1啟動(dòng)子位于外顯子上游100～250bp，P2位于內(nèi)含子內(nèi)，在啟動(dòng)子中包含1個(gè)NF1蛋白結(jié)合位點(diǎn)和一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子AP1相關(guān)蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，對(duì)正常P53基因的轉(zhuǎn)錄，不僅需要二個(gè)啟動(dòng)子的平衡作用，而且P53基因內(nèi)含子也起作用，如內(nèi)含子中有正調(diào)控作用，其調(diào)控有組織特異性。
應(yīng)用[4-5]
RECOMBINANT HUMAN P53 MUTANT細(xì)胞腫瘤抗原P53突變型可以用于p53蛋白和抗體的血清流行病學(xué)研究
克隆、表達(dá)和純化p53蛋白；制備雞抗人p53蛋白的IgY抗體；建立血清p53蛋白和抗體的ELISA方法；初步描述血清p53蛋白和抗體在不同人群中的分布。方法擴(kuò)增p53結(jié)構(gòu)基因序列，插入到原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-1中，在大腸桿菌B121中誘導(dǎo)表達(dá)；以純化的融合蛋白為抗原免疫母雞，得到抗p53—IgY；在此基礎(chǔ)上建立間接ELISA和雙抗體夾心ELISA方法，分別檢測(cè)不同人群血清抗體和p53蛋白，采用描述性方法比較各組人群p53蛋白和抗體陽(yáng)性情況。
結(jié)果SDS—PAGE顯示表達(dá)的GST-p53融合蛋白分子量約為80Kda；制備的抗p53—IgY可特異性識(shí)別原核細(xì)胞中的p53蛋白，不識(shí)別包括GST在內(nèi)的其它細(xì)菌蛋白；間接ELISA和雙抗體夾心ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，不同人群和不同惡性腫瘤的血清p53蛋白和抗體陽(yáng)性率不同，蛋白陽(yáng)性率最高的為職業(yè)暴露組(11.14％)和前列腺癌(12.50％)；抗體陽(yáng)性最高的是惡性腫瘤組(14.59％)和卵巢癌(41.67％)；正常人群組蛋白和抗體陽(yáng)性率分別為0.34％和1.02％；在部分癌前病變(如肝硬化、慢性乙肝、慢性胃炎、胃潰瘍和慢性闌尾炎)中也檢出p53抗體。
結(jié)論p53血清學(xué)指標(biāo)在一定程度上反映了暴露、疾病和基因變化情況。觀察血清p53變化的規(guī)律有助于對(duì)接觸環(huán)境和職業(yè)致癌物的高危人群進(jìn)行健康監(jiān)護(hù)以及惡性腫瘤患者的早期診斷。在臨床疾病的監(jiān)測(cè)以及腫瘤病人的診斷中，血清p53抗體的應(yīng)用價(jià)值較大；在職業(yè)致癌物暴露的監(jiān)測(cè)中則以血清p53蛋白更為敏感。血清p53指標(biāo)作為一種高特異、無(wú)創(chuàng)性、方法簡(jiǎn)便的腫瘤和職業(yè)暴露標(biāo)志物就具有一定的實(shí)用價(jià)值。
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