背景及概述^[1][2]

倍硫磷又名百治屠 (tiguvon)。廣譜、低毒有機磷殺蟲劑。殺蟲作用比敵百蟲強，對人、畜毒性較低，無蓄積作用，性質(zhì)穩(wěn)定，維持藥效長。是殺滅牛皮蠅蚴的特效藥，對移行期第二期蚴蟲也有效，但蚴蟲移行至脊髓階段要避免用藥，否則會引起癱瘓。亦用于殺滅虱、蜱、蠅等。用噴淋或背部澆潑等方法給藥。

純品為無色油狀液體，工業(yè)品為黃棕色油狀液體。商品為50%乳劑，具蒜臭味。對光、熱、堿較穩(wěn)定，可與弱堿性農(nóng)藥混用，但應(yīng)隨配隨用。具觸殺、胃毒作用，并稍具內(nèi)吸作用，殘效期較長。對高等動物的毒性中等，對大白鼠的口服致死中量為216mg/kg。每畝用50%乳劑100～150g(稀釋800～1000倍)對茶葉象甲和綠鱗象甲有較好防治效果。安全間隔期暫定為10～15天。

檢測^[3]

倍硫磷(Fenthion)屬有機磷殺蟲劑，結(jié)構(gòu)為毒性中等，殺 蟲譜寬，殘效期長，使用廣泛。倍硫磷殘留對人、畜等具有一定危害性，倍硫磷的大量推廣使用，必然會給環(huán)境衛(wèi)生和農(nóng)產(chǎn)品安全帶來危害。因此世界各國都對倍硫磷在農(nóng)產(chǎn)品中的允許殘留量作了嚴(yán)格地規(guī)定，我國也不例外。目前倍硫磷檢測方法主要是傳統(tǒng)的色譜法，該方法對機器依賴性強，成本高，操作復(fù)雜，分析時間長，難以滿足高通量、快速、在線檢測的要求。

CN200710021377.5針對現(xiàn)有色譜儀器技術(shù)中的倍硫磷檢測方法操作較復(fù)雜、檢測費用較高、檢測效率低下的缺陷，提供倍硫磷ELISA檢測方法，為倍硫磷農(nóng)藥殘留找到一種既快速準(zhǔn)確又簡單低廉的超微量檢測方法。對倍硫磷農(nóng)藥的殘留量進行檢測，準(zhǔn)確度高、靈敏度高、簡單、快速、低廉。檢測方法包括：

(1)倍硫磷多克隆抗體制備

采用倍硫磷人工抗原的免疫原“倍硫磷-牛血清白蛋白偶聯(lián)物”，常規(guī)免疫方 法免疫新西蘭白兔，制備得到地抗倍硫磷的兔抗血清即為倍硫磷多克隆抗體；

(2)包被

采用倍硫磷人工抗原的包被抗原“倍硫磷-卵清蛋白偶聯(lián)物”1.2μg/mL在微 量分析板中每孔加50μL，4℃冰箱過夜，倒凈，以常規(guī)洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩 沖液洗滌3～6次并倒置、在吸水紙上拍干；

(3)封閉

1％明膠作封閉物，微量分析板每孔100μL，37℃反應(yīng)1小時，倒凈，以常規(guī) 洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩沖液洗滌3～6次并倒置、在吸水紙上拍干；

(4)加抗體及抗體與待測樣品的混合液

用稀釋8000倍的倍硫磷抗血清與待測樣品和空白抗原抗體反應(yīng)溶液即常規(guī) 磷酸鹽-吐溫緩沖液等體積充分混合，后以每孔50μL加到微量分析板中，37℃反 應(yīng)1小時，倒凈，以常規(guī)洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩沖液洗滌3～6次并倒置、在 吸水紙上拍干；

(5)加酶標(biāo)二抗

用pH7.4、0.15mol/L的常規(guī)洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩沖液將商品化的HRP- 羊抗兔IgG稀釋2000倍，微量分析板每孔加50μL，37℃反應(yīng)1小時，倒凈，以 常規(guī)洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩沖液洗滌3～6次并倒置、在吸水紙上拍干；

(6)顯色

微量分析板每孔加50μL的四甲基聯(lián)苯胺底物溶液，37℃顯色反應(yīng)10分鐘

(7)終止反應(yīng)并讀數(shù)

加2mol/L的硫酸，微量分析板每孔加25μL，終止顯色反應(yīng)，酶聯(lián)儀上450nm 處讀出吸光值，空白基質(zhì)作陽性對照吸光值Bo，待測樣品吸光值B；

(8)數(shù)據(jù)處理

計算出結(jié)合率B/Bo及Logit(B/Bo)，

Logit(B/Bo)＝Ln[(B/Bo)/(1-B/Bo)]    公式1

代入如下檢測方程：

Logit(B/Bo)＝-0.7575LogC-1.4928    公式2

其中C為微量分析板孔中測得的倍硫磷濃度，通過公式1和公式2可以求得；

X＝n×2C，n為反應(yīng)前樣品被稀釋的倍數(shù)    公式3

待測樣品中以濃度X表示的倍硫磷殘留量可通過公式3求得。

上述倍硫磷農(nóng)藥殘留量ELISA檢測方法中，抗原抗體反應(yīng)液磷酸鹽-吐溫緩沖 液中甲醇含量為5％、pH值為7.4、離子強度為0.15mol/L，微量分析板中每孔50μL。公式2可由倍硫磷系列標(biāo)準(zhǔn)濃度的競爭曲線進行校正。

應(yīng)用^[2]

為廣譜低毒有機磷殺蟲藥，是防治畜禽外寄生蟲病的主要藥物。通過觸殺和胃毒作用方式進入蟲體，殺滅宿主體內(nèi)外寄生蟲。殺滅作用比敵百蟲強5倍。除了對馬胃蠅蚴、家畜胃腸道線蟲以及虱、蜱、蚤、蚊、蠅等有殺滅作用外，對牛皮蠅蚴有特效(無論是第三期蚴，還是第二期蚴)，在牛皮蠅產(chǎn)卵期使用，可取得良好的效果。

由于性質(zhì)穩(wěn)定，一次用藥可維持藥效2個月左右。對人、畜的毒性較低，大鼠內(nèi)服LD50為177～375mg/kg，皮下注射為345～410mg/kg。在體內(nèi)無蓄積作用，給乳牛用藥后，奶中殘留量極低，可用于乳牛，但應(yīng)在用藥6小時后再行擠奶。用于殺滅牛皮蠅蚴，除對一般藥物有效的第三期蠅蚴有效外，對移行期蠅幼也有效；殺滅家畜體表虱、蜱、蚤、蚊、蠅等。

主要參考資料

[1] 中國茶學(xué)辭典

[2] 新編獸藥實用手冊

[3] CN200710021377.5 農(nóng)藥倍硫磷殘留免疫檢測方法