背景[1][2]
CDKS(細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶)是絲氨酸蘇氨酸激酶家族,被周期蛋白激活后,調(diào)控細(xì)胞周期的進(jìn)程。目前己發(fā)現(xiàn)CDK1-CDK8。CDK5是CDK家族的特殊一員,但不參與細(xì)胞周期的調(diào)控。CDK表達(dá)分布于全身組織,但神經(jīng)系統(tǒng)是最主要富集組織。成年動物大腦是唯一含大量激活型CDK5的組織網(wǎng)。在已分化成熟的神經(jīng)元中,以CDK5的活性為主,而其他CDK5基本沒有活性,因此CDK5可能是神經(jīng)元死亡的上游感受器。CDK5的調(diào)節(jié)蛋白是p35和其類似物p39,盡管在各種類型細(xì)胞中均有表達(dá),由于和主要分布于神經(jīng)元,所以其活性主要集中于神經(jīng)元。
生理狀態(tài)下,CDK5在p35、p39等調(diào)節(jié)亞基的信號作用下錨定于膜上,磷酸化膜性底物,通過平衡促凋亡和促存活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,在神經(jīng)元發(fā)育、遷移、神經(jīng)元存活中發(fā)揮重要作用。在哺乳動物海馬神經(jīng)元的學(xué)習(xí)和記憶功能中發(fā)揮重要作用。
CDK5的活性需要被精細(xì)調(diào)節(jié),在興奮性毒性刺激下(如H2O2、興奮性氨基酸、β淀粉樣蛋白內(nèi)、自由基、氧化應(yīng)激),經(jīng)過鈣激活蛋白酶作用,p35能在梭基末端第位裂解成p25和另一大小為片斷,p25雖比p35片段小,但具備完備的激活CDK5的功能,半衰期卻比p35長一倍,由于缺乏膜錨定信號基序,致使p25- CDK5復(fù)合物細(xì)胞內(nèi)定位發(fā)生改變,無節(jié)制地磷酸化其適宜底物,引發(fā)病理性改變。因此,p25是p35被calpain剪切后殘留下來的羧基端(carboxy-terminal)部分,比p35可以更長時間地激活Cdk5。p25在腦部的累積被認(rèn)為和老年癡呆癥有一定關(guān)系。
p35/p25抗體(p35/p25 antibody)為進(jìn)口分裝,用人工合成的人p35/p25羧基端(carboxy-terminal)的一段多肽進(jìn)行適當(dāng)修飾后免疫rabbit,然后用protein A和抗原多肽親和柱經(jīng)過兩步純化而得到的高純度抗體。p35/p25抗體不僅可以識別p35,也同時可以識別p25。p35/p25抗體-20℃保存,Western一抗稀釋液-20℃或4℃保存,一年有效。Western一抗稀釋液優(yōu)先推薦4℃保存,長期不使用可以考慮-20℃保存,但凍融可能會導(dǎo)致出現(xiàn)輕微的渾濁和少量不溶物。
主要參考資料
[1] 韓永清, 孫愛民, 劉鵲凌, 等. X 線照射原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元后 p35, p25 的表達(dá)及 Cdk5 激酶活性變化[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2009, 29(3): 405-407.