背景^[1-3]

普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基用于細(xì)菌總數(shù)測定、保存菌種及純培養(yǎng)，也可用于消毒效果測定。

營養(yǎng)瓊脂使用原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源;氯化鈉能維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

營養(yǎng)瓊脂配方(每升)：蛋白胨10g；牛肉膏粉3g；氯化鈉5g；瓊脂15g；最終pH 7.3±0.2。

普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基

營養(yǎng)瓊脂使用方法：

1、稱取本品33g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，備用。

2、(食品)以無菌操作稱取檢樣25克(或25mL)，放入含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的玻璃三角瓶中(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)，充分振搖，即為1：10的均勻稀釋液。依次做1：100，1：1000……稀釋液。

3、根據(jù)對(duì)樣品污染情況的估計(jì)，選擇2—3個(gè)合適的稀釋度，分別在做10倍稀釋的同時(shí)，吸取1mL稀釋液于滅菌平皿中，每個(gè)稀釋度做2個(gè)平皿。

4、稀釋液移入平皿后應(yīng)及時(shí)將涼至46℃左右的培養(yǎng)基注入平皿約15mL，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻，同時(shí)將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。待瓊脂凝固后，倒置于36±1℃溫箱中培養(yǎng)48±2h。

5、觀察結(jié)果。

6、菌落計(jì)數(shù)方法：

做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏，在計(jì)下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。

應(yīng)用^[4][5]

用于肥胖與胃食管反流病的關(guān)系及肥胖大鼠食管下段菌群及乳桿菌種的變化的研究

通過細(xì)菌培養(yǎng)、變性梯度凝膠電泳（DGGE）及測序的方法,以期了解高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖是否可影響食管下段的菌群組成。

方法：1.高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠模型的建立20只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后,隨機(jī)分為兩組,每組10只,分別為高脂飲食組和正常飲食對(duì)照組,7w末處死大鼠,通過對(duì)大鼠的體重的變化、Lee’s指數(shù)、血清TG、TCH的檢測了解高脂飲食大鼠的成模情況。

2. 菌群分析方法：通過選擇性培養(yǎng)基分析正常飲食及高脂飲食誘導(dǎo)下兩組SD大鼠食管下段粘膜可培養(yǎng)細(xì)菌的組成及菌群計(jì)數(shù)變化。總需氧菌：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,金黃色葡萄球菌：高鹽甘露醇瓊脂培養(yǎng)基,放線菌：放線菌肉湯培養(yǎng)基,腸球菌：TTC瓊脂培養(yǎng)基,KF鏈球菌：KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基,腸桿菌：EMB瓊脂培養(yǎng)基,總厭氧菌：厭氧菌瓊脂培養(yǎng)基,強(qiáng)化梭菌：強(qiáng)化梭菌瓊脂培養(yǎng)基,產(chǎn)氣莢膜梭菌：PY瓊脂培養(yǎng)基,乳桿菌：LBS培養(yǎng)基,雙歧桿菌：BS瓊脂培養(yǎng)基。

3.利用分子生物學(xué)方法分析乳桿菌種的變化：提取SD大鼠食管下段粘膜可培養(yǎng)乳桿菌DNA,并通過引物擴(kuò)增16SrDNA產(chǎn)物,使用變性梯度凝膠電泳（DGGE）分離16SrDNA產(chǎn)物,切下單獨(dú)條帶凝膠擴(kuò)增純化產(chǎn)物后測序,所得序列在GenBank數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行Blast比對(duì)分析。

參考文獻(xiàn)

[1]Development of gut microflora in obese and lean rats[J].Folia Microbiologica.2010(4)

[2]Inflammation and Intestinal Metaplasia of the Distal Esophagus Are Associated With Alterations in the Microbiome[J].Liying Yang,Xiaohua Lu,Carlos W.Nossa,Fritz Francois,Richard M.Peek,Zhiheng Pei.Gastroenterology.2009(2)

[3]Gastroesophageal Reflux Disease（GERD）:Risk Factors,and Impact on Quality of Life—A Population-based Study[J].Guy D.Eslick,Nicholas J.Talley.Journal of Clinical Gastroenterology.2009(2)

[4]Dysfunction of the lower esophageal sphincter and dysmotility of the tubular esophagus in morbidly obese patients[J].Obesity Surgery.2009(8)

[5]趙鑫.肥胖與胃食管反流病的關(guān)系及肥胖大鼠食管下段菌群及乳桿菌種的變化的研究[D].中南大學(xué),2011.