背景[1-3]
尿素瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)用于鑒別腸道菌尿素酶試驗，配方（每升）：蛋白胨1g；氯化鈉5g；葡萄糖1g；磷酸二氫鉀2g；酚紅0.012g；瓊脂12g；最終pH7.2±0.2。
原理：蛋白胨提供碳源和氮源；氯化鈉維持均衡的滲透壓；磷酸二氫鉀是緩沖劑；具有尿素酶的細(xì)菌分解培養(yǎng)基中的尿素，產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)呈堿性，酚紅指示劑在pH6.8時呈黃色，pH8.1呈粉紅色；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
尿素瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)
使用方法：
1、稱取本品21g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，待冷卻至50—55℃，每200mL培養(yǎng)基加入經(jīng)過濾除菌的20%的尿素溶液20mL或5支(029100)40%的尿素溶液共10mL，尿素的最終濃度為2%。分裝無菌試管，制成斜面。
2、挑取待檢菌的新鮮純培養(yǎng)物，濃密地涂布在尿素瓊脂斜面上，置36±1℃培養(yǎng)24h。
3、于2—4h及24h各觀察一次結(jié)果。培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色時為陽性反應(yīng)，顏色不變者為陰性反應(yīng)。如為陰性可繼續(xù)培養(yǎng)觀察至4d。
應(yīng)用[4][5]
用于一種耐藥變形桿菌的分離、鑒定及其免疫學(xué)效應(yīng)的實驗研究
探討變形桿菌對細(xì)胞免疫和體液免疫的影響，為變形桿菌菌苗研究奠定了實驗基礎(chǔ)。
方法1．留取泌尿系統(tǒng)反復(fù)感染患者的尿液樣本，將所取樣品用分區(qū)劃線法分別接種于腸道菌選擇培養(yǎng)基（S，S瓊脂）及鑒別培養(yǎng)基（伊紅美藍(lán)瓊脂）平皿中，置37℃溫箱培養(yǎng)18～24小時后，觀察菌落特征，在培養(yǎng)后的平皿中找到符合變形桿菌菌落特點的菌落。將挑出的菌落做進(jìn)一步的鑒定。
2．用Blendon鍍銀染色后觀察、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基試驗、動力靛基質(zhì)尿素酶試驗、苯丙氨酸脫氨酶試驗對挑出的菌落作初步鑒定。
3．從泌尿系統(tǒng)反復(fù)感染患者的尿液樣本中分離的變形桿菌通過特殊的處理，將原有的毒性減低，并做毒性試驗以證明其毒性的降低。再用三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基試驗、動力靛基質(zhì)尿素酶試驗、苯丙氨酸脫氨酶試驗、遷徙生長試驗、硫化氫產(chǎn)生試驗、液化明膠試驗、西蒙枸櫞酸鹽試驗、吲哚試驗、氨基酸脫羧酶試驗、糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗（麥芽糖、木糖）、對氯霉素的敏感性試驗對特殊處理后的菌種進(jìn)行最后鑒定。鑒定無誤后將經(jīng)特殊處理的菌種接種、培養(yǎng)、采集、殺菌、離心、純化，稀釋成2×1011／mL的原液，并對原液進(jìn)行無菌試驗和原液檢定。
4．將變形桿菌原液用RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋成2×1010／mL。采集慢性乙型肝炎患者和健康人肝素抗凝外周血，分離外周血單個核細(xì)胞，并體外定向誘導(dǎo)分化和培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞。對照組為RPMI-1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清）500μL+培養(yǎng)的樹突細(xì)胞；實驗組為RPMI-1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清）500μL+培養(yǎng)的樹突細(xì)胞+變形桿菌稀釋液，用流式細(xì)胞儀檢測CD80，CD86的表達(dá)水平。
5．將變形桿菌原液用蒸餾水稀釋成2×109／mL，腹腔接種BALB／C小鼠。采用3H-TdR攝入法檢測小脾細(xì)胞經(jīng)PHA、變形桿菌、ConA體外培養(yǎng)后脾增殖能力的變化；用ELISA法檢測鼠血清抗體水平；并通過ELISA檢測試劑盒檢測脾細(xì)胞加入變形桿菌培養(yǎng)后IFN-γ和IL-2濃度。
6．取肝素抗凝外周血制備人外周血淋巴細(xì)胞，實驗分為五組，分別為只加入培養(yǎng)基、HBcAg、HBcAg+變形桿菌培養(yǎng)液、HBsAg、HBsAg+變形桿菌培養(yǎng)液，用ELISPOT檢測五組外周血淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IFN-γ。
參考文獻(xiàn)
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[5]王鵬.一種耐藥變形桿菌的分離、鑒定及其免疫學(xué)效應(yīng)的實驗研究[D].軍醫(yī)大學(xué),2007.