以0.1%磷酸(pH2.5)為流動(dòng)相A,以乙腈為流動(dòng)相B,進(jìn)行線性梯度洗脫。主峰與未知雜質(zhì)的分離情況見下圖(紅框),分不開。
0.1%磷酸換為0.1%三氟乙酸,其它的色譜條件不變。主峰與未知雜質(zhì)有分離跡象,見下圖(紅框)。
增加三氟乙酸的濃度(0.1%→0.4%),以及調(diào)整流動(dòng)相A的pH值(2.5→4.0),主峰與未知雜質(zhì)的分離滿足要求,見下圖
基線波動(dòng)較大,由A液相換為W液相,再提高三氟乙酸的濃度為0.5%,主峰與未知雜質(zhì)達(dá)基線分離,見下圖(雜質(zhì)譜與上圖不同,是使用調(diào)整后合成工藝的原料藥,原料純度較高,并加入已知雜質(zhì))
分析:由磷酸溶液換為三氟乙酸溶液,可以改善主峰與未知雜質(zhì)的分離度。是因?yàn)樵谌芤褐兄鞣鍨殛栯x子,三氟乙酸為類似離子對試劑,通過離子的相互作用達(dá)到分離目的。