背景[1-3]
BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(增強(qiáng)型)可用于比色皿法檢測(cè)，也可用于微孔板法檢測(cè)。前者雖需較大量（100μl）的蛋白樣品，但由于其在檢測(cè)中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:20（v/v），從而降低干擾物質(zhì)帶來(lái)的影響。后者操作簡(jiǎn)單方便，僅需少量（10-25μl）的蛋白樣品。不過(guò)，由于其在檢測(cè)中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:8（v/v），某種程度上限制干擾物質(zhì)的承受濃度以及降低最低檢測(cè)水平。
BCA蛋白濃度測(cè)定結(jié)果
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前應(yīng)用比較廣泛的蛋白質(zhì)濃度測(cè)定方法?；陔p縮脲反應(yīng)，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu2+還原成Cu+，產(chǎn)生一種紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm處有高的吸光值，該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比。BCA蛋白濃度測(cè)定法實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)濃度測(cè)定的簡(jiǎn)便、靈敏、快速和穩(wěn)定性。試劑盒中提供的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品為用戶制作標(biāo)準(zhǔn)曲線提供了便利。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1)靈敏度高，最小檢測(cè)蛋白量可達(dá)0.2μg，檢測(cè)濃度下限達(dá)到10μg/ml。
2)速度快，比一般的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒顯色所用時(shí)間短。比傳統(tǒng)的Lowry法檢測(cè)速度約快4倍。
3)線性范圍廣，20-2000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性范圍。
4)不受大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80等。
應(yīng)用[4][5]
用于多肽濃度測(cè)定方法的比較研究與應(yīng)用
將牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）與固相合成環(huán)肽CYE（NH2-CYENLRSTC-COOH,C1-C9二硫鍵成環(huán)）、CLP（NH2-CLPLWYPSC-COOH,C1-C9二硫鍵成環(huán)）及CHY（NH2-CHYPTYSKC-COOH,C1-C9二硫鍵成環(huán)）溶液梯度稀釋后分別使用消光系數(shù)法和BCA法進(jìn)行吸光度測(cè)定,通過(guò)消光系數(shù)公式或標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式計(jì)算相應(yīng)濃度值,比較濃度計(jì)算值與理論值之間的差異并計(jì)算測(cè)定方法的精密度。
將對(duì)羥磷灰石粉末可能有不同親和力的多肽CYE與1018（VRLIVAVRIWRR）溶液進(jìn)行梯度稀釋,以非特異性吸附的BSA為對(duì)照,分別與25mg/mL羥磷灰石懸浮液在37℃下共同孵育1小時(shí),離心后取上清液并應(yīng)用個(gè)性化標(biāo)準(zhǔn)曲線的BCA法進(jìn)行濃度測(cè)定,根據(jù)濃度計(jì)算結(jié)果評(píng)價(jià)BSA、CYE與1018在羥磷灰石粉末表面的吸附量。結(jié)果消光系數(shù)法的濃度計(jì)算值與理論值之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
BCA法中,以BSA作為標(biāo)準(zhǔn)品得到的多肽濃度計(jì)算值與理論值之間有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;以待測(cè)多肽自身為標(biāo)準(zhǔn)品求得的多肽濃度計(jì)算值與理論值之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）;與待測(cè)多肽長(zhǎng)度相同、分子量相近的多肽繪制個(gè)性化標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的多肽濃度計(jì)算值與理論值之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）,但求得的濃度計(jì)算值相比BSA標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度計(jì)算值更接近理論值（P<0.05）。不同方法的精密度之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
應(yīng)用多肽自身繪制個(gè)性化標(biāo)準(zhǔn)曲線的BCA法評(píng)價(jià)BSA、CYE與1018在羥磷灰石粉末表面的吸附量,結(jié)果表明,在濃度達(dá)到75μg/mL時(shí),CYE與1018的吸附量到達(dá)平臺(tái)期,而B(niǎo)SA有增加趨勢(shì)。
參考文獻(xiàn)
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